Вход в личный кабинет | Регистрация
Избранное (0) Список сравнения (0)
Ваши покупки:
0 товаров на 0 Р
Итого: 0 Р Купить

Протеин фото: Картинки d0 bf d1 80 d0 be d1 82 d0 b5 d0 b8 d0 bd, Стоковые Фотографии и Роялти-Фри Изображения d0 bf d1 80 d0 be d1 82 d0 b5 d0 b8 d0 bd

Содержание

Какие бывают виды протеина и зачем его принимать? – Москва 24, 01.12.2018

Обозреватель портала Москва 24, фитнес-эксперт и телеведущий Эдуард Каневский рассказывает, какие существуют виды протеина. Так что читаем и подбираем тот, который подойдет именно нам.

Фото: depositphotos/Wavebreakmedia

У профессиональных тренеров есть такое выражение: мышцы растут на диване. Любой новичок или человек, который вообще никогда не занимался в тренажерном зале, сначала воспринимает данные слова с изумлением, а потом и энтузиазмом. Это так здорово – лежать, ничего не делать, а вместо живота будут расти мышцы!

Расти-то они действительно будут, но при соблюдении одного важного правила: сначала нужно как следует потренироваться, создать условия для роста мышц, а уже потом во время отдыха они восстанавливаются и увеличиваются в объемах. И этот процесс не такой быстрый, как хотелось бы многим новичкам, но если заниматься регулярно, результат не заставит себя ждать.

Чтобы в период "диванного" отдыха мышцы восстанавливались и становились больше, важно вовремя и в нужном количестве употреблять главный "строительный материал" для них, а именно – белки, или протеины.

И их должно быть много, до 1,5-2 граммов протеина на килограмм веса. И те, кто хотя бы раз пытались "набрать" такое количество белка из обычных продуктов, знают, что в таком случае приходится постоянно есть. Вот именно с целью уменьшения количества приемов пищи и более быстрого усвоения белка и был придуман такой вид спортивного питания, как протеины.

Что же это такое, не "химия" ли это? Вопрос уместный, поэтому нам важно не только разобраться, что же такое протеины, но и какие их виды бывают вообще и какой может подойти именно вам.

Фото: depositphotos/KostyaKlimenko

Протеин – это белок в такой концентрации, что за один прием вы получаете количество, необходимое для подпитки ваших мышц после тренировки, во время сна или в период, когда у вас большие перерывы между приемами пищи. Собственно, мы сейчас сразу и разобрались, когда пить протеин. Как правило, это одна-две порции в день.

Так как же его получают? Если это хороший бренд (так как на рынке спортивного питания так же попадаются некачественные марки), то протеин получают заводским способом, путем отделения (фильтрации) от чистого белка балластных веществ: углеводов, жиров и прочих соединений. То есть остается практически чистый белок (концентрат). И в дальнейшем протеин могут обогащать разными питательными веществами, витаминами, а также добавляют ароматизаторы для улучшения вкусовых свойств. Сам протеин смешивают с водой, молоком или соком в шейкере или взбивают в блендере.

Каким бывает протеин?

Сывороточный – это самый распространенный вид, делают его из сыворотки молока. Он бывает нескольких видов:

– обычный сывороточный протеин (как правило, на банках пишут Whey protein). Его особенностью является то, что в составе, помимо белка, есть небольшое количество углеводов и жиров. Такой протеин идеально подходит как дополнительный источник белка в промежутках между приемами пищи.

– сывороточный изолят (Iso whey). Это протеин, полностью очищенный от других веществ. Особенностью такого белка является скорость его усвоения: она максимально большая, в отличие от обычного протеина. Данный вид белка идеально подходит для приема сразу после тренировки.

– казеиновый протеин (casein). Это вид белка, особенностью которого является скорость усвоения: благодаря более сложной молекулярной структуре, белок расщепляется дольше обычного протеина, постоянно подпитывая ваши мышцы. Такой тип идеально подходит для приема перед сном.

Фото: depositphotos/Syda_Productions

– часто взрослые люди имеют так называемую непереносимость лактозы (молочный сахар, который может вызывать и аллергические реакции). Для таких людей был выпущен безлактозный сывороточный протеин, который будет являться отличной альтернативой обычному протеину по полезным свойствам без проблем для здоровья.

Поговорим про яичный протеин (egg protein) на основе яичного белка. Доказано, что аминокислотный состав яичного белка наилучшим образом усваивается нашим организмом. Именно по этой причине профессиональные бодибилдеры употребляют яичные белки десятками в сутки. Плюс, в яичном протеине нет жиров и углеводов, что делает его полезнее. Единственным минусом такого протеина является цена, ведь он гораздо дороже протеина на сывороточной основе.

Есть и соевый протеин (soy protein) – отличный вид протеина для вегетарианцев, которых, в том числе, среди спортсменов, становится все больше.

Кнопляный протеин (hemp protein) – еще экзотичный, но уже продающийся в России вид протеина. Несмотря на название, данный протеин является отличным вариантом и конкурентом другим видам. И не зря! Ведь помимо хорошо усвояемого белка, в конопляном протеине много витаминов, минералов, омега-3 и омега-6 жиров, что делает его по-настоящему полезным.

И, наконец, говяжий протеин (beef protein) – пожалуй, самый необычный вид, который я пробовал лично. Производители утверждают, что такой вид белка отлично усваивается и дает лучше результат в приросте мышечной массы, в отличие от других видов протеина. Все возможно, но лично меня сильно смутил вкус, который активно "разбавляют" разного рода ароматизаторами. Только представьте себе говядину со вкусом малины! И, действительно, когда делаешь себе такой напиток, вкусовые свойства кажутся очень странными, даже неприятными. Но, это мое мнение, возможно, именно вам понравится данный вид протеина, и с ним ваши результаты станут лучше.

Спортивное питание Twinlab 100% Whey Protein Fuel - «Отличный протеин + ФОТО кошмарного результата превращения девушки в мужика! »

Всем добрый день! Сегодня хочу поделиться отзывом на данный прот.

Тренируюсь я в зале, уже несколько лет, но откровенно говоря, довольно долгое время я занималась бесцельно, без результатов...в итоге прогресса не было, мышц особо не было, процент жира не уменьшался и ходила я вообще непонятно зачем...

В итоге прошлой осенью я психанула и решила, что пора что-то делать) купила жиротоп и за пару месяцев скинула около 10 кг, при этом, посадив свою цнс. Ушел за тот период не только жир, но и мясо, поэтому в один прекрасный день, посмотрев на себя в зеркало, я поняла, что выгляжу как загнанная лошадь с синяками под глазами и решила, что нужно что-то менять...

Все началось с банального подсчета кбжу... В принципе, подсчет давался мне легко, но вот дневного каллоража не хватало и пр белку тоже отставала неплохо, решено было приобрести прот, чтобы хоть какое-то мясо нарастало...

 

Итак... На данный момент я выгляжу так

с момента отмены жиротопа вес не увеличился, поэтому, несмотря на побочные эффекты, я его все-т рекомендую...

Сразу хочу отметить, что протеин я пью не каждый день, а только в дни тренировок, или в дни, когда по белку вообще ноли..., то есть это раза 4 в неделю. мешаю с молоком, так вкус мягче и приятнее... В одну порцию кидаю 2 скупа, в итоге грамм 50 белка из порта.

Прогресс на тренировках однозначно пошел в гору! В отличие от того, как я занималась раньше я полностью исключила из тренировочной программы кардио(вместо этого я гуляю и катаюсь на велосипеде), но увеличила веса в силовых тренировках, и убрала упражнения на локальные группы мышц, оставив только базу-жим, присед, тяга)))и на руки- жим,тяга))) ну и конечно, на каждой тренировке я делаю пресс.

.

За полгода приема протеина, как я уже говорила выше- вес не увеличился, но мышцы стали более рельефные, вырос объем бедер и рук(примерно по см), стали более скульптурные плечи... Так что, хоть вес и стоит, тело и фигура меняется...

Данный прот рекомендую, однозначно! И не бойтесь заниматься с большими весами, в мужика не превратилась, однозначно😁 я- как яркий пример😊

Протеин – главная добавка всех спортсменов. Но его часто боятся и путают со стероидами (а зря) - Панчер - Блоги

Рассказываем всю правду.

Кажется, первое, что слышат люди, когда идут в тренажерный зал или фитнес-клуб: протеин. Из-за сложившихся стереотипов многие считают эту добавку вредной (якобы от нее множество побочных эффектов), другие думают, что без протеина невозможно накачаться, но в любом случае – это самый распространенный термин в мире спортивного питания.

Вместе с бывшим абсолютным рекордсменом в безэкипировочном жиме лежа (335 кг!!!) Кириллом Сарычевым рассказываем, что же такое протеин и кому он будет полезен.

Протеин – это просто белок. А белок – строительный материал для организма

Прежде всего, давайте разберемся, что такое протеин в широком смысле. Это – белки, то есть органические вещества. Белки – основа мышечной ткани. Благодаря им в организме и проходит обмен веществ, а также многие другие процессы. Белок можно найти практически в любой еде: рыба, курица, мясо, орехи, яйца.

В спорте протеин – это добавка, сделанная на основе белковых смесей. И его используют для целого ряда задач:

• Набрать мышечную массу;

• Похудеть;

• Поддерживать физическую форму;

• Подпитывать организм во время нагрузок.

Почему про протеин всегда так много говорят?

«Все всегда желают добиться максимально качественного результата за минимально возможное время, поэтому комплексный подход (тренировки, правильное питание, спортивное питание) к этому вопросу вполне объясним.

Протеин – действительно самая популярная позиция из всего спортпита, так как в принципе независимо от преследуемых целей он актуален в любом случае и как дополнительный источник белка, и при наборе мышечной массы, и при похудении, и при поддержании формы, с целью оптимизации поступления питательных веществ», – говорит Сарычев.

Почему протеин так важен и как его выбрать?

Главное качество протеина – он помогает организму. Причем не важно: набрать массу, похудеть, или просто себя лучше чувствовать во время занятий спортом. Это главный компонент для мышц и их развития.

И уже дальше идут побочные плюсы протеина: это просто, быстро и удобно. Не всегда получается заранее готовить высокобелковую пищу, которая при этом будет не только полезной, но и вкусной. Куриные грудки чаще всего сухие, орехов много не съешь, в другой еде бывает много лишних углеводов, а еще не надо забывать про аллергии – человек может не переносить продукт, который требуется организму.

«Белок – глaвный cтpуктуpный кoмпoнeнт для фopмиpoвaния ткaнeй, фepмeнтoв, opгaнoв и так далее. Aминoкиcлoты, из кoтopыx cocтoит бeлoк – основной фopмиpующий элeмeнт для мышeчныx вoлoкoн, пoтoму бeз пpoтeинa нeвoзмoжнo дoбитьcя pocтa мышц. Бoлee тoгo, нeдocтaтoк бeлкa в paциoнe пpивoдит к мышeчнoй aтpoфии.

Пpoтeин включaeт нe тoлькo лeйцин, изoлeйцин и вaлин, нo и дpугиe aминoкиcлoты, кoтopыe тaкжe вaжны для opгaнизмa. К тому же, если выбирать качественный высокочищенный протеин, кoличecтвo лeйцинa, изoлeйцинa и вaлинa мoжeт быть дaжe вышe, чeм в oтдeльнoй пopции BCAA (комплекс незаменимых аминокислот). Пpи oцeнкe эффeктивнocти пoчти вceгдa учитывaeтcя цeнoвoй acпeкт и функциональность продукта, и тут, среди всех позиций спортивного питания, протеин несомненно лидирует», – раскладывает Сарычев.

Но если протеин помогает абсолютно противоположным вещам – набор массы и похудение – как же выбрать нужный?

Существуют два основных типа: сывороточный (быстрый) протеин и казеин (медленный). Считается, что с первым лучше набирать, а второй подавляет аппетит и оказывает менее выраженное анаболическое действие.

Вот советы Сарычева, как выбрать протеин:

• Для начала определиться с видом, исходя из целей, времени приема и выделенного бюджета (концентрат сывороточного протеина, казеин, гидролизат белка, изолят сывороточного протеина, соевый протеин, яичный протеин, изолят молочного белка).

• При покупке обращать внимание на процент белка в продукте. Менее 60% – псевдо-протеины; 60-70% – протеин с низким содержанием белка; 70-80% – протеин со средним содержанием белка; Более 80% – протеин с высоким содержанием белка.  Максимальное содержание белка в данном продукте спортивного питания может составлять 93%.

• Качество белка. Очень часто производители разбавляют продукт дешевым белком. Это могут быть: соевый, пшеничный и рисовый белок. Казеин могут заменить сывороточным белком.

• Вкусовые качества, исходя из собственных пожеланий, но учитывая тот факт, что один и тот же вкус достаточно быстро приедается, а некоторые могут быть приторными.

Влияет ли цена на качество протеина?

«Чем шире аминокислотный профиль, чем больше витаминов и минералов в составе и при этом меньше углеводов, тем выше стоимость. Нельзя также забывать и о престиже бренда – продукты от именитых фирм-производителей всегда дороже», – говорит Сарычев.

Почему многие думают, что протеин – вредный? От него бывают побочные эффекты?

Главная причина такого мнения – неразборчивость в вопросе. В России еще давно устоялась ассоциация протеина с химией – то есть, со стероидами. На деле же это совершенно разные вещи.

«Люди считают вредными именно протеиновые добавки, которые якобы химия. Но так называемая химия на самом деле – ААС (анаболические андрогенные стероиды) – это синтетически созданные гормоны человека, которые применяются в любом профессиональном спорте: от шахмат и единоборств до бодибилдинга. Именно использование фармакологии массово осуждается и преследуется по закону.

Пищевые добавки не имеют ничего общего с данным термином. Это всего лишь концентрированная пища. Соответственно, многие так говорят просто от незнания.

Таких людей, к счастью, с каждым годом все меньше и меньше, благодаря ежедневно развивающейся моде на правильное питание и фитнес-индустрию в целом, а также тому, что люди начинали изучать составы и понимать: то, что мы покупаем под видом привычной здоровой еды в продуктовом магазине, порой оказывается не просто нездоровой пищей, а порой и опасной», – рассказывает Сарычев.

Ладно, с этим разобрались. Если протеин – не химия, то все равно: могут ли от него быть побочки? Отвечает Кирилл:

«Побочки от белка – главного строительного материала в нашем организме – могут быть связаны лишь с некачественным продуктом или индивидуальной непереносимостью белка, так же как это бывает с обычными продуктами, только гораздо реже.

Это может проявляться аллергическими реакциями и расстройствами пищеварения. Последний недуг возникает в виду недостаточного количества ферментов расщепляющих белки, либо при дисбактериозах кишечника. При этом патогенная флора кишечного содержимого начинает активно делиться, поскольку белок является питательным веществом не только для человека, но и для микробов. В подобных ситуациях необходимо принимать дополнительно ферменты, либо снижать дозировку протеина».

Можно ли накачаться без протеина? И вообще, каким спортсменам еще он нужен?

Главное, что нужно понимать: протеин не панацея. Это не решение всех спортивных проблем: травм, усталости, набора или сбрасывания веса. Это просто один из необходимых компонентов, чтобы организм продолжал развиваться. В тренировочном процессе можно сколько угодно пить протеин, но не спать или не выкладываться на тренировках – и эффекта не будет.

«Накачаться без протеина можно даже примерно соблюдая необходимый для конкретного человека калораж и нopму БЖУ (белки-жиры-углеводы). В таком случае вполне можно обойтись без дополнительного приема белка. И само собой при грамотном подходе к тренировочному процессу», – говорит Сарычев.

Получается, что можно не употреблять протеин, а просто закидывать в себя пищу, богатую белком?

«Конечно, можно. Просто, во-первых, это элементарно удобнее, во-вторых, дешевле, в-третьих, с протеином, помимо аминокислот, можно получить дополнительно ряд витаминов и минералов. И, конечно же, стоит учитывать уровень спортсмена. Если это начинающий – однозначно можно обойтись без добавок. Но если это спортсмен, выступающий на профессиональной арене, дополнительный источник аминокислот просто необходим», – считает Кирилл.

И, наконец, протеин – это не только для качков. Он важен вообще везде:

«Пpoтeин – глaвнaя дoбaвкa вo вcex видax cпopтa, в кoтopыx пpиcутcтвуeт физичecкaя aктивнocть. Спортивное питание в целом предназначено для того, чтобы помочь организму быстрее восстанавливаться после тренировок, восполнять баланс витаминов и питательных веществ.

А вот количество порции, вид протеина уже отвечают непосредственно за то, какую цель проследует спортсмен: восстановление, набор мышечной массы, похудение или поддержание формы. В каждом виде спорта для каждого спортсмена индивидуальный подход к БЖУ – исходя из поставленных задач и индивидуальных особенностей. Не будем забывать, что протеин – это белок, который не требует соблюдения рецепта для того, чтоб применять его в пищу. Простой, удобный, высокобелковый прием пищи».

Фото: globallookpress.com/Frank May/picture alliance, Nicolas Armer/dpa, Sabine Gudath via www.imago-imag/www.imago-images.de ; instagram. com/sarychevkirill


Промокод на покупку в интернет-магазине iHerb на странице промокод iHerb.

КАЗЕИН VS. СЫВОРОТОЧНЫЙ ПРОТЕИН. Какой протеин лучше для сжигания жира

Какой протеин лучше для сжигания жира

 

 

Протеин для сжигания жира необходимо принимать исходя из следующих соображений.

  1. Низкокалорийная диета, которая подразумевается при сжигании жира, может содержать не достаточное количество белков, что может привести нарушению синтеза белков в организме. Организм, чувствуя нехватку протеина и включает защитные реакции, синтезируя жизненно-важные полипептиды из менее важных продуктов распада, таким образом теряется мышечная масса.
  2. Получая дополнительно протеин организму для его усвоения необходимо тратить гораздо больше энергии, чем при для усвоения жиров и углеводов. Для компенсации недостатка энергии организм вынужден применить свой энергетический запас, жировую ткань.
  3. Разрушение жирных кислот происходит при участии белков. Поступление протеинов не вызывает синтез жиров, т.е. белок не только требует большего времени для усвоения, но и увеличивает время усвоения углеводов.

Складывается впечатление, что для сжигания жира нужно принимать медленный протеин, у которого низкая скорость поглощения из желудочно-кишечного тракта. Классическим медленным протеином является казеин. Его порция усваивается в течение 6-8 часов после употребления. В желудке казеин превращается в сгусток, который переваривается длительное время, обеспечивая низкую скорость расщепления белка. Прием казеина поможет приросту мышечной массы и увеличению силовых показателей грудных мышц, плеч, ног.

Однако помимо медленного расщепления казеин тормозит переваривание других видов белка, имеет меньшую биологическую ценность, снижает аппетит и оказывает слабое анаболическое действие. Поэтому употребляйте казеин только если необходимо устранить голод.

Медленными протеинам можно назвать соевый протеин или же пищевые растительные белки. Но они имеют низкую биологическую ценность, неполный аминокислотный состав и слабое анаболическое и термогенное действие при наборе мышечной массы и могут применяться только лишь как вспомогательные.

Если необходимо поддержать мышцы и стимулировать распад жира применяйте быстрый протеин - сывороточный, а казеин принимайте на ночь.

_______________________________

Это все на сегодня, надеюсь вы найдете в моих словах, что-то важное и полезное для себя.

Чтобы не пропустить новые статьи о том, как улучшать свои спортивные результаты с помощью спортивного питания и избегать наиболее распространенных ошибок при его употреблении, присоединяйтесь к нашей официальной странице в Facebook, следите за обновлениями, комментируйте, задавайте вопросы, делитесь своими результатами и достижениями, пишите, о чем еще вам интересно было бы узнать.

Верьте в себя и в свои силы, и не останавливайтесь на достигнутом! Достигайте своих спортивных целей вместе с нами!

С верой в ваши результаты,

команда «Рowerlifting Мafia»

сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото

О продукте и поставщиках:

Улучшите свое здоровье или благополучие своих клиентов с помощью чудесной коллекции. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото доступны по уникальным предложениям на Alibaba.com. Файл. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото содержат полезные активные ингредиенты, которые устраняют различные проблемы со здоровьем и косметические проблемы. Обширная коллекция. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото гарантирует, что вы найдете все продукты по вашему выбору, независимо от того, покупаете ли вы их для себя, своей семьи, друга или для перепродажи в коммерческих целях.

Расширение. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото получены из подходящих источников, включая растения и научный синтез. Их ценные последствия для здоровья были изучены, и научные доказательства подтверждают эти преимущества. Эти. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото получают в результате строго регулируемых и контролируемых производственных процессов, чтобы гарантировать безопасность и оптимальные преимущества. На Alibaba.com. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото поставщики состоят из сертифицированных производителей, поставщиков и оптовиков, чтобы убедиться в высоком качестве и соответствии нормативным требованиям.

Эти. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото бывают всевозможными, с учетом ряда факторов и требований между отдельными людьми и группами пользователей. Изучая сайт, вы поймете, что расширение. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото выпускаются в соответствующих лекарственных формах, которые подходят как взрослым, так и детям. Эта вариативность гарантирует, что вы всегда найдете. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото, которые соответствуют вашим потребностям. Кроме того, они поставляются с инструкциями для пользователя, а также инструкциями по использованию и хранению для достижения оптимальных результатов.

Alibaba.com - это идеальное место для покупок качественных продуктов, при этом экономя деньги. Изучите широкую категорию. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото доступны на сайте и выберите наиболее подходящий для вас вариант. Независимо от ваших потребностей, вы найдете наиболее подходящий. сухой порошкообразный сывороточный белок в индии фото, чтобы оправдать ваши ожидания удобным способом. Делайте покупки сегодня на сайте и убедитесь, что качество доступно по цене.

%d0%bf%d1%80%d0%be%d1%82%d0%b5%d0%b8%d0%bd PNG, векторы, PSD и пнг для бесплатной загрузки

  • Мемфис дизайн геометрические фигуры узоры мода 80 90 х годов

    4167*4167

  • схема бд электронный компонент технологии принципиальная схема технологическая линия

    2000*2000

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • аудиокассета изолированные вектор старая музыка ретро плеер ретро музыка аудиокассета 80 х пустой микс

    5000*5000

  • Мемфис шаблон 80 х 90 х годов стилей фона векторные иллюстрации

    4167*4167

  • Мемфис бесшовные модели 80 х 90 х стилей

    4167*4167

  • green environmental protection pattern garbage can be recycled green clean

    2000*2000

  • 80 летний юбилей дизайн шаблона векторные иллюстрации

    4083*4083

  • поп арт 80 х патч стикер

    2292*2293

  • диско дизайн в стиле ретро 80 х неон

    5556*5556

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • 80 основных форм силуэта

    5000*5000

  • мемфис бесшовной схеме 80s 90 все стили

    4167*4167

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • рисованной радио 80 х

    1200*1200

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • поп арт 80 х патч стикер

    2292*2293

  • 80 е брызги краски дизайн текста

    1200*1200

  • Элементы рок н ролла 80 х

    1200*1200

  • поп арт 80 х патч стикер

    2292*2293

  • мега распродажа 80

    1200*1200

  • поп арт 80 х патч стикер

    2292*2293

  • поп арт 80 х патч стикер

    3508*2480

  • в первоначальном письме bd логотипа

    1200*1200

  • 80 х годов ретро слово градиент цвета искусства

    1200*1200

  • Ретро ТВ игра 80 х годов в стиле арт дизайн

    1200*1200

  • bd письмо 3d круг логотип

    1200*1200

  • буква bf фитнес логотип дизайн коллекции

    3334*3334

  • Ретро мода 80 х градиент цвета художественного слова

    1200*1200

  • в эти выходные только мега продажи баннер скидки до 80 с

    10418*10418

  • Рождество 80 х годов ретро пиксель

    9449*5315

  • Тенденция персонажа мультфильма 80 х годов

    2000*2000

  • 80 е этап пиксель ретро диско танцы неоновые иллюстрации обои

    4724*2657

  • Мода цвет 80 х годов ретро вечеринка слово искусства

    1200*1200

  • ТВ игра 80 х неоновый эффект слово дизайн

    1200*1200

  • Модный стиль ретро 80 х годов дискотека тема искусства слово

    1200*1200

  • в первоначальном письме bf логотип шаблон векторный дизайн

    1200*1200

  • скидки до 80 векторный дизайн шаблона иллюстрация

    4083*4083

  • поп арт 80 х патч стикер

    2292*2293

  • в первоначальном письме bd логотип шаблон

    1200*1200

  • в первоначальном письме bd шаблон векторный дизайн логотипа

    1200*1200

  • 80 е в стиле ретро ​​мода цвет градиент арт дизайн

    1200*1200

  • Неоновый эффект 80 х годов Ретро вечеринка арт дизайн

    1200*1200

  • 80 дизайн продажа предложение продажа

    1200*1200

  • первый логотип bf штанга

    4500*4500

  • Ретро стиль 80 х вечеринка тема слово дизайн

    1200*1200

  • ретро 80 х годов стиль текста эффект макет

    3000*3000

  • Ностальгическая ретро лента 80 х клипарт

    1200*1200

  • первый логотип bf штанга

    4500*4500

  • Протеин шоколадный, 14 рецептов приготовления блюд с фото пошагово

    Ингредиенты

    • заменитель сахара
    • какао-порошок
    • протеин шоколадный
    • разрыхлитель
    • творог обезжиренный
    • черешня
    • яичный белок
    Перейти на страницу рецепта
    для коржей:
    • яичный белок

      4 шт.

    • яйца

      1 шт.

    • овсяные отруби

      3 ст.л.

    • клетчатка

      3 ст.л.

    • протеин шоколадный

      1 мерная ложка

    • заменитель сахара

      по вкусу

    • молоко

    для начинки:
    • творог

      200 г

    • джем фруктовый

      100 г

    • протеин ванильный

      ½ мерной ложки

    • заменитель сахара

      по вкусу

    • молоко

    • желатин

    Перейти на страницу рецепта
    • нут консервированный

      200 г

    • протеин казеиновый

      38 г

    • протеин шоколадный

      1 скуп

    • шоколадные капли

      1 ст.л.

    • какао

      1 ч.л.

    • корица

      1 ч.л.

    • яблочное пюре

      4 ч.л.

    • заменитель сахара стевия

      6 капель

    • шоколад черный горький 90%

      4 квадратика

    Перейти на страницу рецепта
    • творог обезжиренный

      250-300 г

    • миндаль молотый

      100 г

    • протеин шоколадный

      4 мерных ложки

    • масло оливковое

      1 ч. л.

    • корица

      по вкусу

    • ваниль

      по вкусу

    Перейти на страницу рецепта
    • творог обезжиренный

      250-300 г

    • протеин шоколадный

      100 г

    • миндаль

      100 г

    • масло оливковое

      1 ч.л.

    • корица молотая

      по вкусу

    • ваниль

      по вкусу

    Перейти на страницу рецепта
    • творог обезжиренный

      150 г

    • протеин шоколадный

      50 г

    • яйца

      2 шт.

    • разрыхлитель

      1 пакетик

    • ром

      2 ст.л.

    • овсяные отруби

      2 ст.л.

    • крахмал

      1 ст.л.

    • растворимый кофе

      2 ч.л.

    • заменитель сахара

      по вкусу

    Перейти на страницу рецепта
    • овсяные хлопья

      120 г

    • протеин шоколадный

      90 г

    • молоко сухое обезжиренное

      80 г

    • масло арахисовое

      60 г

    • фундук

      30 г

    • какао-порошок

      2 ч. л.

    • корица молотая

      немного

    • кокосовая стружка

      немного

    Перейти на страницу рецепта
    для теста:
    • яичный белок

      3 шт.

    • клетчатка

      3 ст.л.

    • заменитель сахара

      5 таблеток

    • корица молотая

      1 ч.л.

    • разрыхлитель

      1 ч.л. (не полная)

    • протеин шоколадный

      10 гр

    • ванилин

      ½ ч.л.

    для пропитки:
    для крема:
    Перейти на страницу рецепта
    • яичный белок

      10 шт.

    • протеин шоколадный

      40 г

    • какао

      25 г

    • клетчатка

      20 г

    • масло сливочное

      10 г

    • сода

      ½ ч.л.

    • корица молотая

      по вкусу

    • кофе

      по вкусу

    • ванилин

      по вкусу

    • цедра

      по вкусу

    • уксус

    Перейти на страницу рецепта
    для коржа:
    • бананы

      1 шт.

    • яйца

      1 шт.

    • яичный белок

      4 шт.

    • протеин шоколадный

      2 мерных ложки

    • клетчатка

      2 ст.л.

    • мука овсяная

      1 ст.л.

    • молоко

    • кофе растворимый

    для суфле:
    • молоко обезжиренное

      150 мл

    • яичный белок

      5 шт.

    • протеин

      1 мерная ложка

    • желатин

      10 г

    • заменитель сахара

      по вкусу

    • лимонный сок

    для глазури:
    Перейти на страницу рецепта

    Мечение фотоаффинности (PAL) в химической протеомике: удобный инструмент для исследования белок-белковых взаимодействий (PPI) | Proteome Science

  • 1.

    Jin L, Wang W, Fang G. Нацеливание на межбелковое взаимодействие малых молекул. Annu Rev Pharmacol Toxicol. 2014; 54: 435–56.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 2.

    Лоудер М.А., Аппельбаум Дж.С., Хоберт Э.М., Шепарц А. Визуализация белковых партнерств в живых клетках и организмах.Curr Opin Chem Biol. 2011; 15: 781–8.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 3.

    Цзянь Р.Ю. Зеленый флуоресцентный белок. Анну Рев Биохим. 1998. 67: 509–44.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 4.

    Чжан Дж., Кэмпбелл Р. Э., Тинг А. Ю., Цзянь Р. Я. Создание новых флуоресцентных зондов для клеточной биологии. Nat Rev Mol Cell Biol.2002; 3: 906–18.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 5.

    Андресен М., Шмитц-Салуэ Р., Якобс С. Короткие тетрацистеиновые метки для β-тубулина демонстрируют важность небольших меток для визуализации живых клеток. Mol Biol Cell. 2004; 15: 5616–22.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 6.

    Гриффин Б.А., Адамс С.Р., Цзянь Р.Я.Специфическое ковалентное мечение рекомбинантных белковых молекул внутри живых клеток. Наука. 1998. 281: 269–72.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 7.

    Мартин Б.Р., Гипманс Б.Н., Адамс С.Р. , Цзянь Р.Я. Оптимизация на основе клеток млекопитающих мотива тетрацистеина, связывающегося с биомышьяком, для улучшения флуоресценции и сродства. Nat Biotechnol. 2005; 23: 1308–14.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 8.

    Los GV, Encell LP, McDougall MG, Hartzell DD, Karassina N, Zimprich C, Wood MG, Learish R, Ohana RF, Urh M. HaloTag: новая технология маркировки белков для визуализации клеток и анализа белков. ACS Chem Biol. 2008; 3: 373–82.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 9.

    Keppler A, Gendreizig S, Gronemeyer T., Pick H, Vogel H, Johnsson K. Общий метод ковалентного мечения гибридных белков малыми молекулами in vivo.Nat Biotechnol. 2003; 21: 86–9.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 10.

    Gautier A, Juillerat A, Heinis C, Corrêa IR, Kindermann M, Beaufils F, Johnsson K. Сконструированная белковая метка для мечения нескольких белков в живых клетках. Chem Biol. 2008. 15: 128–36.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 11.

    Чен И., Ховарт М., Лин В., Тинг А.Ю.Сайт-специфическая маркировка белков клеточной поверхности биофизическими зондами с использованием биотинлигазы. Нат методы. 2005; 2: 99–104.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 12.

    Ховарт М., Такао К., Хаяси Ю., Тинг А.Ю. Нацеливание квантовых точек на поверхностные белки в живых клетках с помощью биотинлигазы. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2005; 102: 7583–8.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 13.

    Martell JD, Deerinck TJ, Sancak Y, Poulos TL, Mootha VK, Sosinsky GE, Ellisman MH, Ting AY. Разработал аскорбатпероксидазу как генетически кодируемый репортер для электронной микроскопии. Nat Biotechnol. 2012; 30: 1143–8.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 14.

    Calloway NT, Choob M, Sanz A, Sheetz MP, Miller LW, Cornish VW. Оптимизированные флуоресцентные производные триметоприма для мечения белков in vivo.ChemBioChem. 2007; 8: 767–74.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 15.

    Цай Й, Россье О., Готье, Северная Каролина, Биэ Н., Фардин М.-А, Чжан Икс, Миллер Л. В., Ладу Б., Корнуолл В. В., Шитц М. П.. Цитоскелетная когерентность требует сократимости миозина IIA. J Cell Sci. 2010; 123: 413–23.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 16.

    Goldsmith CR, Jaworski J, Sheng M, Lippard SJ.Селективное мечение внеклеточных белков, содержащих полигистидиновые последовательности, конъюгатом флуоресцеин-нитрилотриуксусная кислота. J Am Chem Soc. 2006; 128: 418.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 17.

    Лата С., Гавутис М., Тампе Р., Пилер Дж. Специфическое и стабильное флуоресцентное мечение белков, меченных гистидином, для разделения образования мультибелковых комплексов. J Am Chem Soc. 2006; 128: 2365–72.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 18.

    Оджида А., Хонда К., Шинми Д., Кийонака С., Мори Ю., Хамачи И. Комплексный зонд олиго-Asp tag / Zn (II) в качестве новой пары для мечения и визуализации флуоресценции белков. J Am Chem Soc. 2006; 128: 10452–9.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 19.

    Дормтин Г., Прествич Г.Д. Перспективы биохимии.1994.

    Google ученый

  • 20.

    Kotzyba ‐ Hibert F, Kapfer I., Goeldner M. Последние тенденции в маркировке фотоаффинности. Angew Chem Int Ed Engl. 1995; 34: 1296–312.

    Артикул Google ученый

  • 21.

    Прествич Г.Д., Дорман Дж. , Эллиотт Дж. Т., Марекак Д.М., Чаудхари А. Б. Фотозонды для определения фосфоинозитов, пептидов и лекарств. Photochem Photobiol. 1997. 65: 222–34.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 22.

    Хашимото М., Хатанака Ю. Последние достижения в области фотоаффинной маркировки на основе DA. Eur J Org Chem. 2008; 2008: 2513–23.

    Артикул CAS Google ученый

  • 23.

    Танака Ю., Бонд М.Р., Колер Дж. Дж. Фотосшивающие агенты освещают взаимодействия в живых клетках. Mol BioSyst. 2008; 4: 473–80.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 24.

    Moerke NJ. Анализ поляризации флуоресценции (FP) для мониторинга связывания пептид-белок или нуклеиновая кислота-белок.Текущий Protoc Chem Biol. 2009; 2009: 1–15.

    Google ученый

  • 25.

    Gubbens J, de Kroon AI. Обнаружение в масштабе всего протеома взаимодействий фосфолипид-белок в митохондриях с помощью фотосшивки и химии щелчков. Mol BioSyst. 2010; 6: 1751–9.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 26.

    Das J. Алифатические DA в качестве зондов фотоаффинности для белков: последние разработки.Chem Rev.2011; 111: 4405–17.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 27.

    Ленц Т., Фишер Дж. Дж., Дрегер М. Исследование взаимодействий малых молекул с белками: новая перспектива функциональной протеомики. J Proteome. 2011; 75: 100–15.

    CAS Статья Google ученый

  • 28.

    Дубинский Л., Кром Б.П., Мейлер М.М. Мечение фото-сродства на основе DA. Bioorg Med Chem.2012; 20: 554–70.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 29.

    Park J, Koh M, Park SB. От нековалентных к ковалентным связям: смена парадигмы в идентификации белков-мишеней. Mol BioSyst. 2013; 9: 544–50.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 30.

    Pham ND, Parker RB, Kohler JJ. Фотокросслинкинг подходы к картированию интерактомов.Curr Opin Chem Biol. 2013; 17: 90–101.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 31.

    Preston GW, Wilson AJ. Фотоиндуцированное ковалентное сшивание для анализа биомолекулярных взаимодействий. Chem Soc Rev.2013; 42: 3289–301.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 32.

    Sumranjit J, Chung SJ. Последние достижения в характеристике и идентификации целей с помощью фотоаффинных зондов.Молекулы. 2013; 18: 10425–51.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 33.

    Xia Y, Peng L. Фотоактивируемые липидные зонды для изучения биомембран с помощью фотоаффинного мечения. Chem Rev.2013; 113: 7880–929.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 34.

    Томохиро Т., Хатанака Ю. Многофункциональные фотозонды на основе DA для выяснения взаимодействия белок-лиганд на основе аффинности.Гетероциклы. 2014; 89: 2697–727.

    CAS Статья Google ученый

  • 35.

    Сакураи К. Фотоаффинные зонды для идентификации углеводсвязывающих белков. Asian J Org Chem. 2015; 4: 116–26.

    CAS Статья Google ученый

  • 36.

    Смит Э. , Коллинз И. Мечение фотоаффинности при идентификации сайтов-мишеней и сайтов связывания. Future Med Chem. 2015; 7: 159–83.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 37.

    Дорман Г., Накамура Х., Пульсифер А, Прествич Г.Д. Жизнь Pi Star: исследование захватывающих и запретных миров фотофора BP. Chem Rev.2016; 116 (24): 15284–398.

    PubMed Статья CAS Google ученый

  • 38.

    Ян Ю, Сон Х, Чен ПР. Генетически кодируемые фото-кросслинкеры для идентификации и картирования белок-белковых взаимодействий в живых клетках.IUBMB Life. 2016; 68: 879–86.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 39.

    Сингх А., Торнтон Э. Р., Вестхаймер Ф. Фотолиз диазоацетилхимотрипсина. J Biol Chem. 1962; 237: PC3006–8.

    CAS Google ученый

  • 40.

    Galardy RE, Craig LC, Jamieson JD, Printz MP. Мечение фотоаффинностью сайтов связывания пептидных гормонов. J Biol Chem. 1974; 249: 3510–8.

    CAS PubMed Google ученый

  • 41.

    Чин Дж. У., Мартин А. Б., Кинг Д. С., Ван Л., Шульц П. Г.. Добавление фотосшивающей аминокислоты к генетическому коду Escherichia coli. Proc Natl Acad Sci. 2002; 99: 11020–4.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 42.

    Чин Дж. У., Шульц П. Г.. Фотосшивание in vivo с мутагенезом неприродных аминокислот.Chembiochem. 2002; 3: 1135–7.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 43.

    Фаррелл И.С., Торони Р., Хазен Дж. Л., Мел Р. А., Чин Дж. У. Фото-перекрестное связывание взаимодействующих белков с генетически кодируемым БП. Нат методы. 2005; 2: 377–84.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 44.

    Tantama M, Lin W-C, Licht S. Зонд для определения профиля белка на основе активности никотинового ацетилхолинового рецептора.J Am Chem Soc. 2008; 130: 15766–7.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 45.

    Виттельсбергер А., Мирке Д.Ф., Розенблатт М. Отображение интерфейсов лиганд-рецептор: приближение к пределу разрешения фотоаффинного сканирования на основе BP. Chem Biol Drug Des. 2008. 71: 380–3.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 46.

    Dugan A, Majmudar CY, Pricer R, Niessen S, Lancia JK, Fung HY-H, Cravatt BF, Mapp AK.Открытие ферментативных мишеней активаторов транскрипции с помощью ковалентного химического захвата in vivo. J Am Chem Soc. 2016; 138: 12629.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 47.

    Сагательян А., Джессани Н., Джозеф А., Хамфри М., Краватт Б.Ф. Зонды на основе активности для протеомного профилирования металлопротеиназ. Proc Natl Acad Sci U S. A. 2004; 101: 10000–5.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 48.

    Rowland MM, Bostic HE, Gong D, Speers AE, Lucas N, Cho W, Cravatt BF, Best MD. Зонды активности фосфатидилинозита (3, 4, 5) -трифосфата для маркировки и протеомной характеристики белков-связывающих партнеров. Биохимия. 2011; 50: 11143.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 49.

    Hilbold B, Perrault M, Ehret C, Niu SL, Frisch B, Pécheur EI, Bourel-Bonnet L. Жирные кислоты, содержащие БП, и родственные им новые светочувствительные флуоресцентные датчики: конструкция, физико-химические свойства и предварительные функциональные исследования.Bioorg Med Chem. 2011; 19: 7464–73.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 50.

    Кавамура А., Хинди С., Михай Д.М., Джеймс Л., Аминова О. Связывания недостаточно: необходима гибкость для фотосшивания киназы Lck фотолигандами BP. Bioorg Med Chem. 2008; 16: 8824–9.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 51.

    Wu Y, Olsen LB, Lau YH, Jensen CH, Rossmann M, Baker YR, Sore HF, Collins S, Spring DR.Разработка многофункционального линкера BP для пептидного сшивания и фотоаффинного мечения. ChemBioChem. 2016; 17: 689–92.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 52.

    Marcon L, Wang M, Coffinier Y, Le Normand F, Melnyk O, Boukherroub R, Szunerits S. Фотохимическая иммобилизация белков и пептидов на алмазных поверхностях, допированных бором на концах BP. Ленгмюра. 2009; 26: 1075–80.

    Артикул CAS Google ученый

  • 53.

    Tal-Gan Y, Naveh S, Klein S, Moshel O, Levitzki A, Gilon C. Изучение белок-пептидных взаимодействий с использованием единиц BP: тематическое исследование протеинкиназы B / Akt и ее ингибитора PTR6154. Анальная биохимия. 2012; 421: 750–4.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 54.

    Гуо Л-З, Хаджипур А.Р., Гавала М.Л., Арбабиан М, Мартемьянов К.А., Аршавский В.Ю., Руохо А.Е. Сульфгидрилреактивные, расщепляемые и радиойодируемые фотозонды БП для изучения белок-белкового взаимодействия. Bioconjug Chem. 2005; 16: 685–93.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 55.

    Li X, Foley EA, Molloy KR, Li Y, Chait BT, Kapoor TM. Подход количественной химической протеомики для выявления межбелковых взаимодействий, опосредованных посттрансляционной модификацией. J Am Chem Soc. 2012; 134: 1982.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 56.

    Li X, Kapoor TM. Подход к профилированию белков, распознающих посттрансляционно модифицированные «хвосты» гистонов. J Am Chem Soc. 2010; 132: 2504.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 57.

    Сакураи К., Тава М., Окада А., Ямада Р., Сато Н., Инахара М., Иноуэ М. Система с двумя активными / неактивными зондами для селективного фотоаффинного мечения белков, связывающихся с небольшими молекулами. Chem-Asian J. 2012; 7: 1567–71.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 58.

    Сакураи К., Ямада Р., Окада А., Тава М., Одзава С., Иноуэ М. Селективное флуоресцентное обнаружение белков, связывающихся с небольшими молекулами, с помощью системы двойной фотоаффинной маркировки. ChemBioChem. 2013; 14: 421–5.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 59.

    Сакураи К., Хатаи Ю., Окада А. Мультивалентные углеводные зонды на основе наночастиц золота: селективное фотоаффинное маркирование углеводсвязывающих белков. Chem Sci.2016; 7: 702–6.

    CAS Статья Google ученый

  • 60.

    Murale DP, Hong SC, Yun J, Yoon CN, Lee JS. Рациональный дизайн фото-сшивающего BODIPY для мечения белков in situ. Chem Commun. 2015; 51: 6643–6.

    CAS Статья Google ученый

  • 61.

    Hw A, Shen W, Sagi A, Chen PR, Schultz PG. Исследование белок-белковых взаимодействий с помощью генетически закодированной фотосшивающей аминокислоты.Chembiochem. 2011; 12: 1854–7.

    Артикул CAS Google ученый

  • 62.

    Чоу К., Упрети Р., Дэвис Л., Чин Дж. У., Дейтерс А. Генетическое кодирование алифатического DA для фотосшивания белков. Chem Sci. 2011; 2: 480–3.

    CAS Статья Google ученый

  • 63.

    Лин С., Хе Д, Лонг Т, Чжан С., Мэн Р., Чен ПР. Генетически кодируемый фото-кросс-линкер расщепляемого белка.J Am Chem Soc. 2014; 136: 11860–3.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 64.

    Ян Ю, Сун Х, Хэ Д, Чжан С., Дай С, Лин С, Мэн Р, Ван Ц, Чен ПР. Генетически кодируемый белок-сшивающий агент с переносимой меткой, идентифицируемой масс-спектрометрией. Nat Commun. 2016; 7: 12299.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 65.

    Янагисава Т., Хино Н. , Ираха Ф., Мукаи Т., Сакамото К., Йокояма С. Широкое фото-сшивание белков, достигаемое генетически кодируемым производным N ε- (бензилоксикарбонил) лизина с диазиринильным фрагментом. Mol BioSyst. 2012; 8: 1131–5.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 66.

    Томохиро Т., Ямамото А., Тацуми Ю. Хатанака Y: [3- (Трифторметил) -3 H-диазирин-3-ил] кумарин как карбен-образующий фотокросс-линкер с замаскированным флуорогенным маяком.Chem Commun. 2013; 49: 11551–3.

    CAS Статья Google ученый

  • 67.

    Моримото С., Томохиро Т., Маруяма Н., Хатанака Ю. Фото-аффинное литье флага кумарина для быстрой идентификации лиганд-связывающих сайтов в белке. Chem Commun. 2013; 49: 1811–3.

    CAS Статья Google ученый

  • 68.

    Томохиро Т., Моримото С., Шима Т., Чиба Дж., Хатанака Ю.Флуорогенный кросс-линкер с изотопным кодом для высокоэффективной идентификации целей на основе фотоаффинной маркировки. Angew Chem Int Ed. 2014; 53: 13502–5.

    CAS Статья Google ученый

  • 69.

    Саймон Б., Хуанг X, Джу Х, Сан Дж., Ян М. Синтез и характеристика реагентов для фотоаффинного мечения в отношении С-концевого домена Hsp90. Org Biomol Chem. 2017; 15 (7): 1597–605.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 70.

    Zhang H, Song Y, Zou Y, Ge Y, An Y, Ma Y, Zhu Z, Yang CJ. Фотоаффинный зонд на основе DA для простой и эффективной ковалентной конъюгации аптамер-белок. Chem Commun. 2014; 50: 4891–4.

    CAS Статья Google ученый

  • 71.

    Bai X, Lu C, Jin J, Tian S, Guo Z, Chen P, Zhai G, Zheng S, He X, Fan E. Обогащение белков-читателей гистоновых модификаций.Angew Chem. 2016; 128: 8125–9.

    Артикул Google ученый

  • 72.

    Сугихара Ю., Тацуми С., Кобори А. Разработка новых светочувствительных олигодезоксирибонуклеотидов с аденозином, конъюгированным с 2'-O-DA, для межцепочечного сшивания ДНК. Chem Lett. 2016; 2016: 46.

    Google ученый

  • 73.

    Чан Э.В., Чаттопадхая С., Паникер Р.С., Хуанг Х, Яо СК. Разработка фотоактивных аффинных зондов для протеомного профилирования: зонды на основе гидроксамата для металлопротеаз. J Am Chem Soc. 2004; 126: 14435–46.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 74.

    Чжу Б., Чжан Х, Пан С., Ван С., Дж. Дж., Ли Дж. С., Яо С. Профилирование протеома in situ и применение в биоимиджинге зондов на основе аффинности малых молекул, полученных из ингибиторов DOT1L. Chem A Eur J. 2016; 22: 7824–36.

    CAS Статья Google ученый

  • 75.

    Li Z, Hao P, Li L, Tan CY, Cheng X, Chen GY, Sze SK, Shen HM, Yao SQ.Дизайн и синтез минималистичных терминальных алкинсодержащих фото-кросслинкеров DA и их включение в ингибиторы киназ для профилирования протеома на основе клеток и тканей. Angew Chem Int Ed. 2013; 52: 8551–6.

    CAS Статья Google ученый

  • 76.

    Li Z, Wang D, Li L, Pan S, Na Z, Tan CY, Yao SQ. «Минималистичные» содержащие циклопропен фото-кросслинкеры, подходящие для визуализации живых клеток и мечения белков на основе аффинности.J Am Chem Soc. 2014; 136: 9990–8.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 77.

    Jeong HS, Hayashi G, Okamoto A. DA. Фотосшивание привлекает активированные комплексы FTO-деметилазы для специфического распознавания N 6-метиладенозина. ACS Chem Biol. 2015; 10: 1450–5.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 78.

    Ван Л., Йошида Т., Муто Й, Мурай Й, Тахрим З. П., Исида А., Накагава С., Сакихама Й, Хашидоко Й, Масуда К.Синтез фотореактивных производных сахарина на основе DA для фотоаффинного мечения вкусовых рецепторов. Eur J Org Chem. 2015; 2015: 3129–34.

    CAS Статья Google ученый

  • 79.

    Чанг Т-Си, Адак А.К., Лин Т-В, Ли П-Дж, Чен И-Дж, Лай Ч., Лян Ц-Ф, Чен И-Дж, Лин Ц-С. Фоторасщепляемая аффинная метка с биотином для легкого высвобождения фото-сшитого углеводсвязывающего белка. Bioorg Med Chem. 2016; 24: 1216–24.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 80.

    Сакураи К., Ясуи Т., Мизуно С. Сравнительный анализ реакционной способности фотоаффинных зондов на основе DA по отношению к углеводсвязывающему белку. Asian J Org Chem. 2015; 4: 724–8.

    CAS Статья Google ученый

  • 81.

    Ямада Р., Хираидзуми М., Нарита С., Сакураи К. Двухэтапный синтез кликабельного фотоаффинного зонда из противоракового сапонина OSW-1 и его фотохимическая реактивность.Asian J Org Chem. 2016; 5: 330–4.

    CAS Статья Google ученый

  • 82.

    Стюарт Дж. А., Пилигиан Б. Ф., Рунделл С. Р., Свартс Б. М.. Трехфункциональный циклооктин для модификации биомолекул, меченных азидом, с помощью фотоперекрестных и аффинных меток. Chem Commun. 2015; 51: 17600–3.

    CAS Статья Google ученый

  • 83.

    Чин Дж.В., Санторо ЮЗ, Мартин А.Б., Кинг Д.С., Ван Л., Шульц П.Г.Добавление п-азидо-1-фенилаланина в генетический код Escherichia c oli. J Am Chem Soc. 2002; 124: 9026–7.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 84.

    Мори Х., Ито К. Различные способы взаимодействия SecY-SecA, выявленные сайт-направленным фото-перекрестным связыванием in vivo. Proc Natl Acad Sci. 2006; 103: 16159–64.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 85.

    Чин Дж. У., Кропп Т. А., Андерсон Дж. К., Мукхерджи М., Чжан З., Шульц П. Г.. Расширенный генетический код эукариот. Наука. 2003; 301: 964–7.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 86.

    Лю В., Брок А., Чен С., Чен С., Шульц П.Г. Генетическое включение неприродных аминокислот в белки в клетках млекопитающих. Нат методы. 2007; 4: 239–44.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 87.

    Типпманн Э.М., Лю В., Саммерер Д., Мак А.В., Шульц П.Г. Генетически кодируемый фотошаблон DA в Escherichia coli. ChemBioChem. 2007; 8: 2210–4.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 88.

    Чен С., Шульц П.Г., Брок А. Усовершенствованная система для создания и анализа мутантных белков, содержащих неприродные аминокислоты, в Saccharomyces cerevisiae. J Mol Biol. 2007; 371: 112–22.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 89.

    Бентин Т., Хамзави Р., Саломонссон Дж., Рой Х., Ибба М., Nielsen PE. Фотореактивные бициклические аминокислоты как субстраты для мутантных фенилаланил-тРНК синтетаз Escherichia coli. J Biol Chem. 2004; 279: 19839–45.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 90.

    Чен Н-Т, Варфилд Л., Хан С. Положения TFIIF и TFIIE в комплексе преинициации транскрипции РНК-полимеразы II. Nat Struct Mol Biol. 2007. 14: 696–703.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 91.

    Хино Н., Окадзаки Ю., Кобаяши Т., Хаяси А., Сакамото К., Йокояма С. Фото-перекрестное связывание белков в клетках млекопитающих путем сайт-специфического включения фотореактивной аминокислоты. Нат методы. 2005; 2: 201–6.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 92.

    Hino N, Hayashi A, Sakamoto K, Yokoyama S.Сайт-специфическое включение неприродных аминокислот в белки в клетках млекопитающих с расширенным генетическим кодом. Nat Protoc. 2006; 1: 2957–62.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 93.

    Шликер С., Вайбезан Дж., Патцельт Х., Тессарц П., Штруб С., Зет К., Эрбсе А., Шнайдер-Мергенер Дж., Чин Дж. В., Шульц П. Г.. Распознавание субстрата шапероном AAA + ClpB. Nat Struct Mol Biol. 2004; 11: 607–15.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 94.

    Weibezahn J, Tessarz P, Schlieker C, Zahn R, Maglica Z, Lee S, Zentgraf H, Weber-Ban EU, Dougan DA, Tsai FT. Термостойкость требует рефолдинга агрегированных белков за счет транслокации субстрата через центральную пору ClpB. Клетка. 2004. 119: 653–65.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 95.

    Suchanek M, Radzikowska A, Thiele C. Фото-лейцин и фотометионин позволяют идентифицировать белок-белковые взаимодействия в живых клетках.Нат методы. 2005; 2: 261–8.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 96.

    Li G, Liu Y, Yu X, Li X. Мультивалентный фотоаффинный зонд для мечения малых молекул, связывающих белки. Bioconjug Chem. 2014; 25: 1172–80.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 97.

    Ян Т., Лю З., Ли XD. Разработка химических зондов на основе DA для идентификации «читателей» и «стирателей» модификаций гистонов.Chem Sci. 2015; 6: 1011–7.

    CAS Статья Google ученый

  • 98.

    Хорнинг Б.Д., Сучиу Р.М., Гадири Д., Улановская О., Мэтьюз М.Л., Лум К.М., Бэкус К., Браун С.Дж., Розен Х., Краватт Б.Ф. Химическое протеомное профилирование метилтрансфераз человека. J Am Chem Soc. 2016; 138: 13335.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 99.

    Vervacke JS, Funk AL, Wang Y-C, Strom M, Hrycyna CA, Distefano MD.Фотоактивируемый изопреноид, содержащий DA: синтез и применение в исследованиях с изопренилцистеинкарбоксилметилтрансферазой. J Org Chem. 2014; 79: 1971-8.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 100.

    Сакураи К., Ямагути Т., Мизуно С. Дизайн и синтез флуоресцентных зондов фотоаффинности гликолипидов и их фотореактивности. Bioorg Med Chem Lett. 2016; 26: 5110–5.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 101.

    Сакурай К., Одзава С., Ямада Р., Ясуи Т., Мизуно С. Сравнение реакционной способности углеводородных фотоаффинных зондов с различными фотореактивными группами. ChemBioChem. 2014; 15: 1399–403.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 102.

    Park J, Koh M, Koo JY, Lee S, Park SB. Исследование специфических связывающих белков с фотоаффинными линкерами для эффективной деконволюции целевого белка. ACS Chem Biol. 2015; 11: 44–52.

    PubMed Статья CAS Google ученый

  • 103.

    YoungáKoo J, Yellamelli V, BumáPark S. Неспецифическое мечение белков фотоаффинных линкеров коррелирует с их молекулярной формой в живых клетках. Chem Commun. 2016; 52: 5828–31.

    Артикул CAS Google ученый

  • 104.

    Лян Дж., Чжан Л., Тан XL, Ци Ю.К., Фэн С., Дэн Х, Янь Й, Чжэн Дж. С., Лю Л., Тянь КЛ.Химический синтез фотоаффинных зондов на основе диубиквитина для выборочного профилирования убиквитин-связывающих белков. Angew Chem. 2017; 129: 2788–92.

    Артикул Google ученый

  • 105.

    Muttach F, Mäsing F, Studer A, Rentmeister A. Новые аналоги AdoMet в качестве инструментов для ферментативного переноса фото-кросслинкеров и фиксации взаимодействий РНК-белок. Chem A Eur J. 2017; 23 (25): 5988–93.

    CAS Статья Google ученый

  • 106.

    Lin E-W, Boehnke N, Maynard HD. Конъюгация белок-полимер через сродство к лиганду и фотоактивацию глутатион-S-трансферазы. Bioconjug Chem. 2014; 25: 1902–1909.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 107.

    Буш Дж. Т., Уолпорт Л. Дж., Макгуран Дж. Ф., Леунг И. К., Берридж Дж., Ван Беркель С. С., Басак А., Кесслер Б. М., Скофилд С.Дж. Четырехкомпонентная реакция Уги позволяет провести целесообразный синтез и сравнение фотоаффинных зондов.Chem Sci. 2013; 4: 4115–20.

    CAS Статья Google ученый

  • 108.

    Кляйнер П., Хейденройтер В., Шталь М, Коротков В.С., Зибер С.А. Полный перечень протеомного связывания фонового фотосшивающего агента. Angew Chem Int Ed. 2017; 56: 1396–401.

    CAS Статья Google ученый

  • 109.

    Рамил С.П., Лин К. Химия фотоклика: инициируемая флуорогенным светом реакция лигирования in vivo.Curr Opin Chem Biol. 2014; 21: 89–95.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 110.

    Herner A, Marjanovic J, Lewandowski TM, Marin V, Patterson M, Miesbauer L, Ready D, Williams J, Vasudevan A, Lin Q. 2-арил-5-карбокситетразол в качестве новой метки сродства к фото для идентификации мишеней лекарств. J Am Chem Soc. 2016; 138: 14609.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 111.

    Li Z, Qian L, Li L, Bernhammer JC, Huynh HV, Lee JS, Yao SQ. Химия тетразола Photoclick: повторное исследование его пригодности в качестве биоортогональной реакции и потенциальных приложений. Angew Chem Int Ed. 2016; 55: 2002–6.

    CAS Статья Google ученый

  • 112.

    Gygi SP, Rist B, Gerber SA, Turecek F, Gelb MH, Aebersold R. Количественный анализ сложных белковых смесей с использованием аффинных меток, кодированных изотопами. Nat Biotechnol.1999; 17: 994–9.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 113.

    Shiio Y, Aebersold R. Количественный протеомный анализ с использованием изотопно-кодированных аффинных меток и масс-спектрометрии. Nat Protoc. 2006; 1: 139–45.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 114.

    Томпсон А., Шафер Дж., Кун К., Кинле С., Шварц Дж., Шмидт Г., Нойман Т., Джонстон Р., Мохаммед А. К., Хамон К.Тандемные массовые метки: новая стратегия количественной оценки для сравнительного анализа сложных белковых смесей с помощью МС / МС. Anal Chem. 2003; 75: 1895–904.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 115.

    Росс П.Л., Хуанг Ю.Н., Марчезе Дж. Н., Уильямсон Б., Паркер К., Хаттан С., Хайновски Н., Пиллай С., Дей С., Дэниэлс С. и др. Мультиплексный количественный анализ белка в Saccharomyces cerevisiae с использованием реагентов с аминореактивными изобарными метками. Протеомика клеток Mol.2004. 3: 1154–69.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 116.

    Raijmakers R, Berkers CR, de Jong A, Ovaa H, Heck AJ, Mohammed S. Автоматизированное последовательное мечение изотопов в режиме онлайн для количественного определения протеасом для тканеспецифического разнообразия протеасом. Протеомика клеток Mol. 2008; 7: 1755–62.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 117.

    Boersema PJ, Raijmakers R, Lemeer S, Mohammed S, Heck AJ. Мультиплексное диметил-мечение стабильных изотопов пептидов для количественной протеомики. Nat Protoc. 2009; 4: 484–94.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 118.

    Deracinois B, Flahaut C, Duban-Deweer S, Karamanos Y. Сравнительные и количественные глобальные подходы к протеомике: обзор. Протеомы. 2013; 1: 180–218.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 119.

    Онг С.Е., Благоев Б., Кратчмарова И., Кристенсен Д. Б., Стин Х, Пандей А., Манн М. Мечение стабильных изотопов аминокислотами в культуре клеток, SILAC, как простой и точный подход к протеомике экспрессии. Протеомика клеток Mol. 2002; 1: 376–86.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 120.

    Онг С.Е., Манн М. Практический рецепт мечения стабильных изотопов аминокислотами в культуре клеток (SILAC). Nat Protoc. 2006; 1: 2650–60.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 121.

    Ю ЙХ, Юн Дж, Юн Си, Ли Дж. Химическая протеомная идентификация Т-пластина как нового фактора ответа клетки-хозяина при инфекции ВГС. Научный доклад 2015; 5: 9773.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 122.

    Oda Y, Huang K, Cross FR, Cowburn D, Chait BT. Точное количественное определение экспрессии белка и сайт-специфического фосфорилирования.Proc Natl Acad Sci U S. A. 1999; 96: 6591–6.

    CAS PubMed PubMed Central Статья Google ученый

  • 123.

    Lanucara F, Eyers CE. Количественная протеомика на основе масс-спектрометрии с использованием SILAC. Методы Энзимол. 2011; 500: 133–50.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • 124.

    Онг С.Е., Кратчмарова И., Манн М. Свойства 13C-замещенного аргинина в маркировке стабильных изотопов аминокислотами в культуре клеток (SILAC).J Proteome Res. 2003; 2: 173–81.

    CAS PubMed Статья Google ученый

  • Генетически закодированные стратегии высвобождаемого фото-перекрестного связывания для изучения межбелковых взаимодействий в живых клетках

  • 1

    Amanda, L.G. И Ким, Д.Дж. Белковые взаимодействия и рак: нацеленная на центральную догму. Curr. Вершина. Med. Chem. 11 , 258–280 (2011).

    Артикул Google ученый

  • 2

    Berggård, T., Линсе, С. и Джеймс, П. Методы обнаружения и анализа белок-белковых взаимодействий. Proteomics 7 , 2833–2842 (2007).

    Артикул Google ученый

  • 3

    Физики, Э.М. и Филдс, С. Белковые взаимодействия: методы обнаружения и анализа. Microbiol. Res. 59 , 94–123 (1995).

    CAS Google ученый

  • 4

    Фам, Н.Д., Паркер, Р. Б. и Колер, Дж. Дж. Фотокросслинкинг подходы к картированию интерактомов. Curr. Opin. Chem. Биол. 17 , 90–101 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 5

    Янг, Ю., Сонг, Х. и Чен, П.Р. Генетически кодируемые фотокросслинкеры для идентификации и картирования белок-белковых взаимодействий в живых клетках. IUBMB Life 68 , 879–886 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 6

    Дэвис, Л.И Чин, Дж. Конструктор белков: приложения расширения генетического кода в клеточной биологии. Нат. Rev. Mol. Cell Biol. 13 , 168–182 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 7

    Liu, C.C. И Шульц, П. Добавление нового химического состава в генетический код. Annu. Rev. Biochem. 79 , 413–444 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 8

    Чин, Дж.W. Расширение и перепрограммирование генетического кода клеток и животных. Annu. Rev. Biochem. 83 , 379–408 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 9

    Li, F. et al. Расширение генетического кода для химии фотокликов в E. coli , клетках млекопитающих и A. thaliana . Angew. Chem. Int. Эд. 52 , 9700–9704 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 10

    Линь, С.и другие. Сайт-специфическая инженерия химических функций на поверхности живого вируса гепатита D. Angew. Chem. Int. Эд. 52 , 13970–13974 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 11

    Si, L. et al. Создание вирусов гриппа A в виде живых, но неспособных к репликации вирусных вакцин. Наука 354 , 1170–1173 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 12

    Престон, Г.W. & Wilson, A.J. Фотоиндуцированное ковалентное сшивание для анализа биомолекулярных взаимодействий. Chem. Soc. Ред. 42 , 3289–3301 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 13

    Кляйнер, П., Гейденройтер, В., Шталь, М., Коротков, В.С. & Sieber, S.A. Полный перечень протеомов связывания фонового фотошерлинкера. Angew. Chem. Int. Эд. 56 , 1396–1401 (2017).

    CAS Статья Google ученый

  • 14

    Winnacker, M., Breeger, S. , Strasser, R. & Carell, T. Новые диазиринсодержащие фотоаффинные ДНК-зонды для исследования взаимодействий ДНК-белок. ChemBioChem 10 , 109–118 (2009).

    CAS Статья Google ученый

  • 15

    Ай, Х.-В., Шен, В., Саги, А., Чен, П.Р. и Шульц, П.G. Исследование межбелковых взаимодействий с генетически кодируемой фотосшивающей аминокислотой. ChemBioChem 12 , 1854–1857 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 16

    Чин, Дж. У., Мартин, А. Б., Кинг, Д. С., Ван, Л., Шульц, П. Г. Добавление фотосшивающей аминокислоты к генетическому коду Escherichia coli . Proc. Natl. Акад. Sci. США 99 , 11020–11024 (2002).

    CAS Статья Google ученый

  • 17

    Чин, Дж. У. и другие. Добавление п-азидо-1-фенилаланина в генетический код Escherichia coli . J. Am. Chem. Soc. 124 , 9026–9027 (2002).

    CAS Статья Google ученый

  • 18

    Типпманн, Э.М., Лю, В., Саммерер, Д., Мак, А.В. И Шульц, П. Генетически кодируемый диазириновый фотосшивающий агент в Escherichia coli . ChemBioChem 8 , 2210–2214 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • 19

    Zhang, M. et al. Генетически включенный сшивающий агент обнаруживает сотрудничество шаперонов в устойчивости к кислоте. Нат. Chem. Биол. 7 , 671–677 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 20

    Янагисава Т. и др. Фотосшивание белков с широким диапазоном действия достигается с помощью генетически кодируемого производного N (эпсилон) - (бензилоксикарбонил) лизина с диазиринильным фрагментом. Мол. BioSyst. 8 , 1131–1135 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 21

    Hino, N. et al. Фотоперекрестное связывание белков в клетках млекопитающих за счет сайт-специфического включения фотореактивной аминокислоты. Нат. Методы 2 , 201–206 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • 22

    Фрейнкман, Э., Чнг, С.-S. & Kahne, D. Комплекс, который вводит липополисахарид в бактериальную внешнюю мембрану, образует двухбелковый плагин. Proc. Natl. Акад. Sci. США 108 , 2486–2491 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 23

    Hino, N. et al. Генетическое включение фото-сшиваемой аминокислоты обнаруживает новые белковые комплексы с GRB2 в клетках млекопитающих. J. Mol. Биол. 406 , 343–353 (2011).

    CAS Статья Google ученый

  • 24

    Коин, И. и др. Генетически кодируемые химические зонды в клетках выявляют путь связывания урокортина-I с CRF класса B GPCR. Cell 155 , 1258–1269 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 25

    Фаррелл, И. С., Торони, Р., Хазен, Дж. Л., Мел, Р.А. И Чин, Дж. Фото-перекрестное связывание взаимодействующих белков с генетически кодируемым бензофеноном. Нат. Методы 2 , 377–384 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • 26

    Хино, Н., Хаяси, А., Сакамото, К. и Йокояма, С. Сайт-специфическое включение неприродных аминокислот в белки в клетках млекопитающих с расширенным генетическим кодом. Нат. Protoc. 1 , 2957–2962 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • 27

    Лэйси, В.К., Луи, Г.В., Ноэль, Дж. П. и Ван, Л. Расширение библиотеки и разнообразия субстратов пирролизил-тРНК синтетазы для включения неприродных аминокислот, содержащих конъюгированные кольца. ChemBioChem 14 , 2100–2105 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 28

    Ai, X., Mu, J. & Xing, B. Последние достижения световой тераностики. Theranostics 6 , 2439–2457 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 29

    Barber, D.M. и другие. Оптический контроль нейрональной активности с помощью светового открывателя каналов GIRK (LOGO). Chem. Sci. 7 , 2347–2352 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 30

    Judkins, J.C. et al. Фоторасщепляемый замаскированный лиганд ядерного рецептора позволяет контролировать температуру ° C во времени.elegans разработка. Angew. Chem. Int. Эд. 53 , 2110–2113 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 31

    Минден Дж. Сравнительная протеомика и разностный гель-электрофорез. BioTechniques 43 , 739–745 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • 32

    Zhang, S. et al. Сравнительная протеомика выявляет отчетливые взаимодействия шаперона и клиента в поддержании устойчивости бактерий к кислоте. Proc. Natl. Акад. Sci. США 113 , 10872–10877 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 33

    Lin, S. et al. Генетически кодируемый фото-кросс-линкер расщепляемого белка. J. Am. Chem. Soc. 136 , 11860–11863 (2014).

    CAS Статья Google ученый

  • 34

    Yang, Y. et al. Генетически кодируемый белок-сшивающий агент с переносимой меткой, идентифицируемой масс-спектрометрией. Нат. Commun. 7 , 12299 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 35

    Shigdel, UK, Zhang, J. & He, C. Зонды фото-перекрестного связывания ДНК на основе диазирина для исследования взаимодействий белок-ДНК. Angew. Chem. Int. Эд. 47 , 90–93 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 36

    Гадживала, К. С. и Берли, С.К. HDEA, периплазматический белок, который поддерживает кислотную устойчивость патогенных кишечных бактерий. J. Mol. Биол. 295 , 605–612 (2000).

    CAS Статья Google ученый

  • 37

    Hong, W. et al. Периплазматический белок HdeA проявляет шапероноподобную активность исключительно в диапазоне pH желудка, трансформируясь в неупорядоченную конформацию. J. Biol. Chem. 280 , 27029–27034 (2005).

    CAS Статья Google ученый

  • 38

    Tapley, T.L., Franzmann, T.M., Chakraborty, S., Jakob, U. & Bardwell, J.C. Рефолдинг белка за счет связывания и высвобождения шаперона под действием pH. Proc. Natl. Акад. Sci. США 107 , 1071–1076 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 39

    Кройер, Т., Сава, Дж., Хубер, Р. и Клаузен, Т.Протеазы HtrA имеют консервативный механизм активации, который может запускаться различными молекулярными сигналами. Нат. Struct. Мол. Биол. 17 , 844–852 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 40

    Dunham, W.H., Mullin, M. & Gingras, A.-C. Аффинная очистка в сочетании с масс-спектрометрией: основные принципы и стратегии. Proteomics 12 , 1576–1590 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 41

    Синз, А.Исследование белок-белковых взаимодействий в живых клетках методами химического сшивания и масс-спектрометрии. Анал. Биоанал. Chem. 397 , 3433–3440 (2010).

    CAS Статья Google ученый

  • 42

    Риннер, О. и др. Идентификация сшитых пептидов из больших баз данных последовательностей. Нат. Методы 5 , 315–318 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 43

    Ян, Б.и другие. Идентификация сшитых пептидов из сложных образцов. Нат. Методы 9 , 904–906 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 44

    Маковски М.М., Виллемс Э., Янсен П.В. & Vermeulen, M. Сшивающая иммунопреципитация-МС (xIP-MS): топологический анализ хроматин-ассоциированных белковых комплексов с использованием очистки с одной аффинностью. Мол. Cell Proteomics 15 , 854–865 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 45

    Shi, Y. et al. Стратегия анализа архитектуры нативных макромолекулярных сборок. Нат. Методы 12 , 1135–1138 (2015).

    CAS Статья Google ученый

  • 46

    Dingar, D. et al. BioID идентифицирует новых взаимодействующих партнеров c-MYC в культивируемых клетках и опухолях ксенотрансплантата. J. Proteomics 118 , 95–111 (2015).

    CAS Статья Google ученый

  • 47

    Loh, K.H. и другие. Протеомный анализ неограниченных клеточных компартментов: синаптических щелей. Cell 166 , 1295–1307 (2016).

    CAS Статья Google ученый

  • 48

    Rhee, H.W. и другие. Протеомное картирование митохондрий в живых клетках с помощью пространственно ограниченного ферментативного мечения. Наука 339 , 1328–1331 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 49

    Roux, K.J., Kim, D.I., Raida, M. & Burke, B. Беспорядочный гибридный белок с биотин-лигазой идентифицирует проксимальные и взаимодействующие белки в клетках млекопитающих. J. Cell Biol. 196 , 801–810 (2012).

    CAS Статья Google ученый

  • 50

    Краватт, Б. Ф., Райт, А. И Козарич, Дж. Профилирование белков на основе активности: от химии ферментов до протеомной химии. Annu. Rev. Biochem. 77 , 383–414 (2008).

    CAS Статья Google ученый

  • 51

    Li, Z. et al. Дизайн и синтез минималистичных терминальных алкинсодержащих диазириновых фото-кросслинкеров и их включение в ингибиторы киназ для профилирования протеома на основе клеток и тканей. Angew. Chem. Int. Эд. 52 , 8551–8556 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 52

    Peng, T. & Hang, H.C. Бифункциональный химический репортер жирных кислот для анализа S-пальмитоилированных мембранных белок-белковых взаимодействий в клетках млекопитающих. J. Am. Chem. Soc. 137 , 556–559 (2015).

    CAS Статья Google ученый

  • 53

    Кэри, М.Ф., Петерсон, К. И Смейл, С. ПЦР-опосредованный сайт-направленный мутагенез. Cold Spring Harb. Protoc. 2013 , 738–742 (2013).

    PubMed Google ученый

  • 54

    Reid, T. et al. Rhotekin, новая предполагаемая мишень для Rho, несущая гомологию с серин / треонинкиназой, PKN и рофилином в Rho-связывающем домене. J. Biol. Chem. 271 , 13556–13560 (1996).

    CAS Статья Google ученый

  • 55

    Fu, Q.и другие. Молекулярное клонирование, характеристика экспрессии и сопоставление нового предполагаемого ингибитора активности Rho GTPase, RTKN, с D2S145 – D2S286. Genomics 66 , 328–332 (2000).

    CAS Статья Google ученый

  • 56

    Тумкео Д., Ватанабе С. и Нарумия С. Физиологические роли эффекторов Rho и Rho у млекопитающих. евро. J. Cell Biol. 92 , 303–315 (2013).

    CAS Статья Google ученый

  • 57

    Ихара, К.и другие. Кристаллическая структура RhoA человека в преимущественно активной форме в комплексе с аналогом GTP. J. Biol. Chem. 273 , 9656–9666 (1998).

    CAS Статья Google ученый

  • 58

    Танну, Н.С. И Хемби, С. Двумерный гель-электрофорез с разностной флуоресценцией для сравнительного протеомного профилирования. Нат. Protoc. 1 , 1732–1742 (2006).

    CAS Статья Google ученый

  • 59

    Пауло, Дж.A. Подготовка образца для протеомного анализа с использованием стратегии GeLC-MS / MS. J. Biol. Методы 3 , e45 (2016).

    Артикул Google ученый

  • 60

    Kern, R., Malki, A., Abdallah, J., Tagourti, J. & Richarme, G. Escherichia coli HdeB является шапероном кислотного стресса. J. Bacteriol. 189 , 603–610 (2007).

    CAS Статья Google ученый

  • 61

    Дворский, р., Блюменштейн, Л., Веттер, И. & Ахмадиан, М. Р. Структурное понимание взаимодействия ROCKI с переключаемыми регионами RhoA. J. Biol. Chem. 279 , 7098–7104 (2004).

    CAS Статья Google ученый

  • 62

    Никич И., Канг Дж.Х., Жирона Г.Э., Арамбуру И.В. И Лемке, Э.А. Маркировка белков на живых клетках млекопитающих с помощью химии щелчков. Нат. Protoc. 10 , 780–791 (2015).

    CAS Статья Google ученый

  • Первые изображения одиночных белков благодаря листу графена

    Джейкоб Арон

    Вы бы дважды подумали, прежде чем сделать селфи, если бы вспышка камеры была достаточно яркой, чтобы сжечь кожу. Биологи сталкиваются с аналогичной проблемой при изучении белков под микроскопом, поскольку современные методы визуализации могут разрушить молекулы. Теперь на помощь пришел графен - ультратонкая форма углерода - и предоставил самые первые изображения единственного белка.

    Фотографирование белков позволяет нам понять их структуру и функции. Это важно для лечения заболеваний, при которых нарушаются белки, таких как болезнь Альцгеймера. Но методы визуализации, такие как рентгеновская кристаллография или криоэлектронная микроскопия, основываются на усреднении показаний миллионов молекул, что дает нам нечеткое представление.

    Усреднение необходимо, потому что освещение молекул рентгеновскими лучами или высокоэнергетическими электронами может повредить белок, а это означает, что вы не можете получить полную картину из одного изображения, а также потому, что сложно удерживать одну молекулу в одном месте достаточно долго, чтобы сфотографируйте его.Теперь Жан-Николя Лоншан из Цюрихского университета, Швейцария, и его коллеги придумали способ сделать именно это.

    Объявление

    Они начинают с распыления раствора белков на лист графена, фиксируя белки на месте. Затем они помещают это под электронный голографический микроскоп, который использует интерференционные картины между электронами для создания изображения.

    Ручная горка

    Этот вид приборов использует электроны с низкой энергией, которые не повреждают белок. Загвоздка в том, что они также хуже проникают в детектор микроскопа. Вот где пригодится графен. «В оптической микроскопии у вас есть предметное стекло. Для нашей электронной микроскопии нам нужно было найти достаточно тонкую подложку, чтобы через нее проходили электроны », - говорит Лонгшамп.

    Команда проверила свой метод на ряде белковых молекул размером всего несколько нанометров, таких как гемоглобин в красных кровяных тельцах.Результаты хорошо согласуются с молекулярными моделями, полученными с помощью рентгеновской кристаллографии (см. Изображение ниже), что позволяет предположить, что изображения являются точными.

    Теперь они планируют делать снимки других молекул, которые невозможно отобразить с помощью существующих методов, и надеются, в конечном итоге, внести свой вклад в новые медицинские методы лечения. «Есть некоторые заболевания, которые связаны с неправильной структурой определенных белков», - говорит Лонгшамп. «В будущем мы сможем представить разницу в строении здорового человека и человека, который болеет.”

    Ссылка: arxiv.org/abs/1512.08958

    (Изображение предоставлено: Жан-Николя Лоншан из Цюрихского университета, Швейцария)

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности. Если ваш браузер не принимает файлы cookie, вы не можете просматривать этот сайт.


    Настройка вашего браузера для приема файлов cookie

    Существует множество причин, по которым cookie не может быть установлен правильно.Ниже приведены наиболее частые причины:

    • В вашем браузере отключены файлы cookie. Вам необходимо сбросить настройки браузера, чтобы он принимал файлы cookie, или чтобы спросить вас, хотите ли вы принимать файлы cookie.
    • Ваш браузер спрашивает вас, хотите ли вы принимать файлы cookie, и вы отказались. Чтобы принять файлы cookie с этого сайта, нажмите кнопку «Назад» и примите файлы cookie.
    • Ваш браузер не поддерживает файлы cookie. Если вы подозреваете это, попробуйте другой браузер.
    • Дата на вашем компьютере в прошлом.Если часы вашего компьютера показывают дату до 1 января 1970 г., браузер автоматически забудет файл cookie. Чтобы исправить это, установите правильное время и дату на своем компьютере.
    • Вы установили приложение, которое отслеживает или блокирует установку файлов cookie. Вы должны отключить приложение при входе в систему или проконсультироваться с вашим системным администратором.

    Почему этому сайту требуются файлы cookie?

    Этот сайт использует файлы cookie для повышения производительности, запоминая, что вы вошли в систему, когда переходите со страницы на страницу. Чтобы предоставить доступ без файлов cookie потребует, чтобы сайт создавал новый сеанс для каждой посещаемой страницы, что замедляет работу системы до неприемлемого уровня.


    Что сохраняется в файле cookie?

    Этот сайт не хранит ничего, кроме автоматически сгенерированного идентификатора сеанса в cookie; никакая другая информация не фиксируется.

    Как правило, в файлах cookie может храниться только информация, которую вы предоставляете, или выбор, который вы делаете при посещении веб-сайта.Например, сайт не может определить ваше имя электронной почты, пока вы не введете его. Разрешение веб-сайту создавать файлы cookie не дает этому или любому другому сайту доступа к остальной части вашего компьютера, и только сайт, который создал файл cookie, может его прочитать.

    Генетически кодируемый селективный по остаткам фото-кросслинкер для фиксации белок-белковых взаимодействий в живых клетках

    Основные моменты

    Генетически кодируемый селективный по отношению к лизину белок фото-кросслинкер в живых клетках

    взаимодействий с белками с селективностью по лизину с временным разрешением

    Получение сайта фотосшивки с предсказуемым остатком и сшитых пептидов

    Захват неуловимого взаимодействия фермент-субстрат и проверка сайта лизина PTM

    The Bigger Picture

    Белковые взаимодействия играют ключевую роль практически во всех клеточных процессах. Идентификация временных и слабых белковых взаимодействий в живых клетках все еще остается сложной задачей для традиционных стратегий. Сочетая в себе преимущества временного контроля и уникальную способность селективности по остаткам, фото-кросслинкеры являются мощным инструментом для идентификации динамических, слабых и временных взаимодействий белков в живых клетках со специфичностью, точностью и надежностью, таким образом, для лучшего понимания биологических процессы и патофизиология. Исследование фото-сшивания с избирательностью остатков может привести к открытию новых фото-сшивающих агентов и помочь в расширении репертуара современной технологии сшивания белков и интерактивной протеомики.Следовательно, этот подход окажет влияние на широкий спектр областей, включающих взаимодействия белок-белок и лиганд-рецептор, таких как фундаментальные биологические исследования, интерактивная протеомика, структурные исследования белков и химическая биология.

    Резюме

    Генетически кодируемые неселективные фото-кросслинкеры страдают от непредсказуемых сайтов перекрестного сшивания и ложноположительных взаимодействующих белков, таким образом, идентификация белковых взаимодействий и картирование точных интерфейсов взаимодействия остаются в значительной степени труднодостижимыми в живых системах. Здесь мы сообщаем, что генетически кодируемый, избирательный по остаткам белок фото-кросслинкер делает возможным ковалентное сшивание взаимодействующих белков с проксимальным лизином при активации УФ-светом in vitro и в живых клетках. Используя этот фото-сшивающий агент, мы демонстрируем стратегию сшивания для фиксации белок-белковых взаимодействий с селективностью по остаткам с временным разрешением. Кроме того, эта стратегия сшивания дает лизин-селективный сайт сшивания и предсказуемый сшитый пептид, которые служат прямым доказательством белок-белковых взаимодействий и облегчают масс-спектрометрический анализ.Что еще более важно, этот фото-сшивающий агент позволяет улавливать неуловимое взаимодействие фермент-субстрат с непосредственно взаимодействующим лизином и проверять сайт ацетилирования субстрата. Эта стратегия обеспечивает более высокое пространственно-временное разрешение, точность и надежность для исследования динамических, временных и слабых белок-белковых взаимодействий в живых системах.

    Цели ООН в области устойчивого развития

    ЦУР 3: хорошее здоровье и благополучие

    Ключевые слова

    белок-белковые взаимодействия

    модификации белков

    фотоаффинное мечение

    взаимодействие фермент-субстрат

    интерактивная протеомика

    фото-сшивка неестественная аминокислота

    Рекомендуемые статьи Цитирующие статьи (0)

    Просмотреть аннотацию

    © 2019 Elsevier Inc.

    Рекомендуемые статьи

    Ссылки на статьи

    Химия фотореактивных сшивающих агентов | Thermo Fisher Scientific

    Фотоактивируемые реакционноспособные химические группы в реагентах для мечения и сшивания белков и биомолекул включают арилазиды (фенилазиды) и диазирины. В этой статье описываются химические реакции и биологические исследования применения этого класса реагентов.


    Вступление

    Реактивные группы фотореактивного сшивающего агента

    Фотоактивируемые (или фотохимические) реакции сшивания требуют энергии света для инициирования. Фотореактивные группы представляют собой химически инертные соединения, которые становятся реактивными при воздействии ультрафиолетового или видимого света. Практически все разновидности фотореактивных групп, используемых в реагентах для сшивания, требуют воздействия ультрафиолетового света (УФ-света) для молекулярной активации. На следующем изображении представлен пример типа инструмента, используемого с фотоактивируемыми сшивающими агентами и приложениями для сшивания УФ-излучением.

    Типичная ультрафиолетовая лампа.Ультрафиолетовые лампы Thermo Scientific Pierce - это компактные, многофункциональные ультрафиолетовые лампы с настраиваемой длиной волны 252 нм, 302 нм и 365 нм, настраиваемые с помощью диска, специально для использования с фотоактивируемыми сшивающими агентами и методами УФ-сшивания.


    Фотохимические реактивные группы имеют определенные преимущества перед строго термохимическими реагентами при сшивании и маркировке биологических образцов и экспериментов. Что наиболее важно, они позволяют добавлять реагенты на раннем этапе эксперимента, а затем инициировать сшивание (путем воздействия УФ-света) на более позднем этапе, который согласуется с конкретным интересующим биологическим состоянием. Кроме того, многие из этих групп будут конъюгировать с любой из нескольких общих функциональных групп в белках, с которыми они сталкиваются в течение короткого времени, когда они активируются. Эта особенность делает их особенно полезными для улавливания белковых взаимодействий (см. Обсуждение ниже).

    Фотореактивные группы, которые были включены в сшивающее и маркирующее соединение для использования в методах биоконъюгирования, включают арилазиды, азидо-метил-кумарины, бензофеноны, антрахиноны, некоторые диазосоединения, диазирины и производные псоралена. Наиболее полезными из них для исследования биологии белков являются арилазиды и диазирины.

    Избранные фотореактивные химические группы, используемые при сшивании белков. Традиционно наиболее широко использовались разновидности арилазидов (также называемые фенилазидами, два верхних ряда).Псорален (внизу справа) реагирует почти исключительно с РНК или ДНК, и используется для маркировки нуклеиновых кислот или для сшивания и исследования взаимодействия белков с нуклеиновыми кислотами. Диазирины (внизу слева) - это новый класс соединений, популярность и доступность которых растет для исследования белков. Волнистые связи представляют собой реагент для метки или один конец сшивающего агента, имеющего реактивную группу.


    Техническое руководство по сшивающим реагентам

    Это 45-страничное руководство полезно как для новичков, так и для тех, кто имеет опыт работы с сшивающими реагентами. Он начинается с основного обсуждения сшивки и используемых реагентов. Руководство также содержит обсуждение различных приложений, в которых применялось перекрестное связывание, в том числе мощную технику переноса меток для идентификации или подтверждения взаимодействий с белками. Химия сшивания рассматривается в удобном для понимания формате, предназначенном для передачи важной информации, которая вам нужна, без потери деталей. Каждый сшивающий реагент Пирса показан вместе с его структурой, молекулярной массой, длиной спейсера и химической реакционной способностью.Справочник завершается списком отличных ссылок по использованию сшивающих агентов и глоссарием общих терминов сшивания.

    Загрузить Техническое руководство по сшивающим реагентам


    Химия реакции арилазида

    Когда арилазид подвергается воздействию УФ-света (от 250 до 350 нм), он образует нитреновую группу, которая может инициировать реакции присоединения с двойными связями, вставку в сайты C – H и N – H или последующее расширение кольца для реакции с нуклеофил (например,g. , первичные амины). Последний путь реакции доминирует, когда в образце присутствуют первичные амины.

    Тиолсодержащие восстанавливающие агенты (например, DTT или 2-меркаптоэтанол) следует избегать в растворе образца на всех этапах до и во время фотоактивации, поскольку они восстанавливают азидную функциональную группу до амина, предотвращая фотоактивацию. Реакции можно проводить в различных буферных условиях, не содержащих аминов. Если вы работаете с гетеробифункциональными фотореактивными сшивающими агентами, используйте буферы, совместимые с обеими химическими реактивами.Эксперименты должны проводиться при приглушенном свете и / или с реакционными сосудами, покрытыми фольгой, до тех пор, пока не потребуется фотореакция. Обычно фотоактивация осуществляется с помощью переносной УФ-лампы, расположенной рядом с реакционным раствором и светящей прямо на него (т.е. не через стекло или полипропилен) в течение нескольких минут.

    Существуют три основные формы арилазидов: простые фенилазиды, гидроксифенилазиды и нитрофенилазиды. Как правило, коротковолновый УФ-свет (например, 254 нм; 265-275 нм) необходим для эффективной активации простых фенилазидов, в то время как длинный УФ-свет (например.g, 365 нм; От 300 до 460 нм) достаточно для нитрофенилазидов. Поскольку коротковолновый УФ-свет может повредить другие молекулы, нитрофенилазиды обычно предпочтительны для экспериментов по сшиванию.

    Схема реакции арилазида для фотохимического конъюгации, активируемого светом. Волнистые связи представляют собой реагент для метки или один конец сшивающего агента, имеющего реактивную группу фенилазида; R представляет собой белок или другую молекулу, содержащую нуклеофильные или активные водородные группы.Жирные стрелки указывают на доминирующий путь. Галогенированные арилазиды реагируют напрямую (без расширения кольца) из состояния активированного нитрена.

    Методы биоконъюгирования, 3-е издание

    Bioconjugate Techniques, 3 rd Edition (2013) Грег Т. Hermanson - это крупное обновление книги, которая широко известна как исчерпывающий справочник в области биоконъюгации.

    Bioconjugate Techniques - это полный учебник и руководство по протоколам для ученых-биологов, желающих изучить и освоить методы биомолекулярного сшивания, маркировки и иммобилизации, которые составляют основу многих лабораторных приложений. Книга также является исчерпывающим и надежным справочным пособием для исследователей, стремящихся разработать новые стратегии конъюгации для совершенно новых приложений.Он также содержит обширное введение в область биоконъюгирования, которое охватывает все основные приложения технологии, используемые в различных научных дисциплинах, а также содержит советы по созданию оптимального биоконъюгата для любых целей.

    Загрузить Bioconjugate Techniques, 3 rd Edition


    Применения для сшивки арилазида

    Хотя гомобифункциональные арилазидные сшивающие агенты были коммерчески доступны в прошлом, они имеют ограниченную применимость по сравнению с альтернативами и больше не продаются (поисковая литература для «BASED, бис- [β- (азидосалициламидо) этил] дисульфид)»). Почти все применения арилазидных реагентов включают гетеробифункциональную химию, в которой арилазидная группа спарена напротив другого типа реакционноспособной группы, такой как амино-реактивный сложный эфир NHS. Эти соединения используются в различных стратегиях «наживка и добыча» для исследования взаимодействий белок-белок или взаимодействий белок-нуклеиновая кислота.

    1. Захват белковых взаимодействий

    Гетеробифункциональные сшивающие агенты на основе сложного эфира NHS / арилазида используются в экспериментах для обнаружения или анализа условий, в которых происходит конкретное взаимодействие белков.

    Предположим, исследователь имеет очищенный белок (X) и желает сравнить два условия относительного содержания второго белка (Y), который, как известно исследователю, является прямым партнером по связыванию X. Во-первых, сшивающий агент вступает в реакцию изолированно (и в приглушенном свете) с X; сшивающий агент присоединяется своим NHS-эфирным концом к поверхностным первичным аминам X, маркируя X несколькими готовыми к активации арилазидными группами. После обессоливания X для удаления непрореагировавшего сшивающего агента X добавляют к образцам Y, которые представляют различные условия обработки (например,g., клеточные лизаты, полученные из клеток, выращенных в различных условиях). Наконец, по прошествии достаточного времени для связывания X и Y друг с другом образец облучают УФ-светом, чтобы активировать арилазидный фрагмент, который затем конъюгируется с любой функциональной группой белка, с которой он находится.

    Если рядом расположены аминокислоты партнера по связыванию (Y), образуются ковалентные поперечные связи между X и Y. На этом этапе результаты можно проанализировать несколькими способами. Предполагая, что у исследователя есть специфические антитела для обнаружения X, продукты можно проанализировать с помощью электрофореза и вестерн-блоттинга.Конъюгированные белки будут работать как один более крупный белок, а не как отдельные отдельные белки, и это различие может быть обнаружено и количественно определено.

    В зависимости от длины спейсера и характеристик расщепляемости сшивающего агента, различные конкретные пары белковых интеракторов можно более или менее эффективно конъюгировать и анализировать по-разному. Арилазидные соединения, которые являются гетеробифункциональными с амино-реактивными, сульфгидрильными и карбонильными группами, коммерчески доступны.


    2. Обозначьте взаимодействия белков

    Перенос метки является расширением только что описанного гетеробифункционального сшивания и используется для исследования белковых взаимодействий. Помимо двух сшивающих концов, эти реагенты включают обнаруживаемую метку или метку (например, флуорофор или биотин) и расщепляемую спейсерную ветвь (обычно дисульфидную связь).

    Sulfo-SBED, реагент переноса биотиновой метки. Характеристики этого реагента включают амино-реактивный сложный эфир сульфо-NHS ​​(внизу слева), арилазидную группу (вверху слева), биотин (справа) и расщепляемую дисульфидную связь в плече сложного эфира NHS.


    После того, как пары взаимодействующих белков были сшиты (как описано выше для гипотетических белков X и Y), спейсерное плечо, соединяющее их, может быть отщеплено. Это разделяет белки, но оставляет метку (биотин в случае Sulfo-SBED) прикрепленной к Y. Таким образом, биотиновая метка эффективно переносится с белка «приманки» (X) на белок «жертвы» (Y).


    Диазирин Реакционная химия

    Диазирины - это новый класс фотоактивируемых химических групп, которые вводятся в различные виды сшивающих и маркирующих реагентов.Фрагмент диазирина (азипентаноат) имеет лучшую фотостабильность, чем фенилазидные группы, и его легче и эффективнее активируют длинноволновым УФ-светом (от 330 до 370 нм).

    Фотоактивация диазирина создает реактивные карбеновые промежуточные соединения. Такие промежуточные соединения могут образовывать ковалентные связи посредством реакций присоединения с любой боковой цепью аминокислоты или пептидным каркасом на расстояниях, соответствующих длинам спейсерных плеч конкретного реагента.

    Схема реакции диазирина для фотохимического конъюгирования с активацией светом. R представляет собой реагент для метки или один конец сшивающего агента, имеющего реактивную с диазирином группу; (P) представляет собой белок или другую молекулу, которая содержит нуклеофильные или активные водородные группы R '.


    Применение сшивки диазирином

    Хотя арилазидные реагенты более широко цитируются в литературе, это, вероятно, изменится по мере того, как диазириновые реагенты станут более доступными и постепенно заменят арилазид в большинстве приложений.

    1. Захват белковых взаимодействий

    Если доступны диазириновые эквиваленты гетеробифункциональных арилазидных реагентов, возможны все эксперименты по взаимодействию с белками. В настоящее время доступно несколько разновидностей диазириновых соединений, которые имеют на противоположном конце амино-реактивный эфир NHS.

    Пример активируемой светом конъюгации с диазириновым сшивающим агентом. SDA представляет собой гетеробифункциональный сшивающий агент на основе эфира NHS и диазирина.Первичные амины одного белка можно пометить в темноте. Затем этот белок можно добавить к сложному раствору (например, клеточному лизату) и дать ему возможность связываться с его специфическими взаимодействующими элементами. Наконец, воздействие ультрафиолетового света инициирует конъюгацию с любыми близлежащими химическими группами (то есть с партнером по связыванию).


    2. Метаболическое мечение и сшивание

    Стабильность и очень маленький размер диазириновой группы также позволяет проводить эксперименты по сшиванию, которые включают метаболическое мечение. Например, фото-L-лейцин и фото-L-метионин являются аналогами природных аминокислот, которые содержат диазириновую группу в своих боковых цепях. Когда эти соединения добавляются в культуральную среду вместо их нативных аналогов, оборудование для синтеза белков будет использовать фотореактивные версии для создания белков. Таким образом, сами белки становятся сшивающими реагентами для стратегий сшивания in vivo.

    Строения фотореактивных аминокислот. Эти диазириновые аналоги лейцина и метионина могут быть включены с помощью механизма трансляции в белковые структуры в качестве формы метаболического мечения для анализа взаимодействия белков.


    1. Ковалентное сшивание вазоактивного кишечного полипептида с его рецепторами на интактных лимфобластах человека. Вуд, К. и О’Дорисио, М.С. J Biol Chem (1985) 260: 1243-1247
    2. Химическое сшивание с фотоактивируемым диазирином сшивающим агентом исследовано методами MALDI- и ESI-MS / MS. Гомеш, А.Ф. и Гоццо, Ф. К. J масс-спектрометр (2010) 45: 892-9
    3. Фотосшивание сигнальной последовательности формирующегося препролактина с 54-килодальтонным полипептидом сигнальной распознающей частицы. Криг, Калифорния, Уолтер П. и Джонсон, A.E.
      Proc Natl Acad Sci USA (1986) 83: 8604-8606

    Рациональный дизайн фото-сшивающего BODIPY для мечения белков in situ

    Фото-сшивающие агенты стали критически важными инструментами для исследования межбелковых взаимодействий в сложных протеомах, но в настоящее время доступно мало фото-сшивающих агентов.Здесь мы сообщаем о первом рациональном дизайне фото-перекрестно связывающего флуорофора BODIPY ( pcBD ) и его биологическом применении для мечения биомолекул. В качестве фотосенсибилизирующего функционального мотива арилкетоновая группа была включена во флуорофор BODIPY, и ряд белков был помечен соединениями pcBD при УФ-облучении. Для исследования межбелковых взаимодействий в смеси белков был получен аминофункциональный pcBD , ковалентно связанный с пептидом, связывающим убиквитинлигазу.После УФ-облучения мы смогли успешно визуализировать субстраты в общем лизате. Эти результаты подтвердили концепцию пространственно управляемой маркировки через фотоактивацию каркаса pcBD и продемонстрировали ее потенциальное использование для приложений маркировки in situ .

    У вас есть доступ к этой статье

    Подождите, пока мы загрузим ваш контент... Что-то пошло не так.

    Добавить комментарий

    Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

    *
    *