Вход в личный кабинет | Регистрация
Избранное (0) Список сравнения (0)
Ваши покупки:
0 товаров на 0 Р
Итого: 0 Р Купить

Станозолол это: Станозолол — это… Что такое Станозолол?

Содержание

Станозолол - это... Что такое Станозолол?

Станозоло́л — анаболический стероидный препарат, производное андростана (дигидротестостерона). Станозолол является антагонистом прогестерона. тем не менее, препарат не защищает от прогестсагенного действия нандролонов (19-нортестостерон)[источник не указан 409 дней]

Станозолол, выпускаемый под собственным названием и под торговой маркой Стромбафорт

Запрещённый к применению в спорте препарат[источник не указан 409 дней], выпускается официально и подпольно [источник не указан 409 дней],неофициально используется спортсменами в качестве допинга, а также в бодибилдинге.

Зарегистрированные торговые марки: Винстрол[1][2], Стромба[1], Стромбафорт[2], Станабол[2].

Использование в качестве допинга

Один из широко применявшихся стероидных допинг-препаратов. Его выявляли у таких бегунов как Бен Джонсон, Ольга Шишигина, бодибилдеров Шон Рэй и Нимрод Кинг у боксера Тони Джеймса, а также у многих других спортсменов самых различных видов спорта.

Несмотря на риск развития вирилизма, станозолол используется женщинами, занимающихся силовыми видами спорта, как сравнительно менее опасный[3]. Приём станозолола приводит в большей мере не к набору мышечной массы[3], а рельефности[3] основных мышц, при этом сжигается жир[3] и усиливается венозный рисунок[3].

Если принять анаболическо-андрогенное воздействие тестостерона за 1, то этот кооффициент для нандролона составит 10 и для станозолола — 30[4]. По сравнению с тестостероном станозолол в два раза более активен как анаболический агент, и на треть более активен в качестве андрогена[4].

Исследование 1986 года показало, что введение низких доз станозолола (10 мг в день) бегунам в течение 6 недель не даёт прироста в максимальной скорости и повышения анаэробного порога, но заметно подавляет содержание тестостерона в крови[5]. Согласно данным другого исследования, двухнедельное введение 10 мг станозолола здоровым мужчинам привело к падению содержания тестостерона в крови на 55% и рядом других гормональных изменений[6].

После того как были разработаны точные способы обнаружения станозолола, использование его в профессиональном спорте пошло на убыль[1]. Наряду с нандролоном, кленбутеролом, метандростенолоном и метилтестостероном входит в «большую пятерку» анаболиков, которые лаборатории обязаны определять с максимальной чувствительностью[1].

Лекарственные формы

Станозолол выпускается как в оральной, так и в инъекционной формах. Инъекционный станозолол — водная суспензия. При внутримышечном введении эффективность станозолола приблизительно в полтора раза выше.

Фармакологическое действие (по данным производителя)

[7]

Проникая в ядра клетки, станозолол активизирует генетический аппарат клетки, что приводит к увеличению синтеза ДНК, РНК и структурных белков, активации ферментов звена и усилению тканевого дыхания, окислительного фосфорилирования, синтеза АТФ и накоплению макроэргов в клетке. Стимулирует анаболические и подавляет катаболические процессы, вызванные глюкокортикоидами. Приводит к увеличению мышечной массы, уменьшение отложения жира, улучшает трофику тканей, способствует отложению кальция в костях, задерживает в организме азот, фосфор, серу, калий, натрий и воду. Гемопоэтическое действие связано с увеличением синтеза эритропоэтина. Противоаллергическое действие обусловлено повышением концентрации С1 фракции комплемента. Андрогенная активность может способствовать развитию вторичных половых признаков по мужскому типу.

Показания к лекарственному применению

В комплексной терапии:

  • Нарушение синтеза белков, кахексия различного происхождения[7];
  • Травмы, ожоги, до-и послеоперационные периоды, период восстановления после инфекционных болезней и облучения[7];
  • Почечная и надпочечниковая недостаточность, токсический зоб, мышечная дистрофия, остеопороз, отрицательный азотистый баланс при кортикостероидной терапии, гипо-и апластическая анемия[7].

Противопоказания к лекарственному применению

  • Повышенная чувствительность к компонентам препарата[7];
  • Рак предстательной железы, рак молочной железы у мужчин, карцинома молочной железы у женщин с гиперкальциемией[7];
  • Ишемическая болезнь сердца, атеросклероз[7];
  • Печёночная и почечная недостаточность[7];
  • Острый и хронический простатит[7];
  • Период беременности и кормления грудью[7];
  • Детский возраст[7].

Побочные эффекты

Аналогичны другим стероидам. Гепатотоксичен, оказывает негативное воздействие на простату. Может способствовать выпадению волос и появлению угревой сыпи (акне). Препарат незначительно подавляет производство эндогенного тестостерона и не приводит к возникновению гинекомастии. У женщин даже одна таблетка может привести к выраженной вирилизации. Станозолол может также привести к повышению артериального давления[3], он увеличивает количество холестерина[3] (что может привести к ишемической болезни сердца[3]), а передозировка препарата может привести к гипертрофии миокарда[3].

По данным производителя станозолола (стромбафорта) его применение может вызвать у женщин, угнетение функции яичников, нарушения менструального цикла, гиперкальциемию[7]. У мужчин: препубертатный период — симптомы вирилизации, идиопатическая гиперпигментация кожи, замедление или прекращение роста (кальцификация ростовых зон трубчатых костей), в постпубертатном периоде — раздражение мочевого пузыря, гинекомастия, приапизм

[7]; в пожилом возрасте — гипертрофия и / или карцинома предстательной железы[7]. Другие побочные эффекты согласно с данными производителя включают прогрессирование атеросклероза, периферические отёки, диспепсические расстройства, нарушения функции печени с желтухой, изменения в лейкоцитарной формуле, боли в длинных трубчатых костях, гипокоагуляция со склонностью к кровотечениям[7].

Исследование 1989 года показало, что оральный приём 6 мг станозолола в день штангистами в течение 6 недель привёл к снижению содержания липопротеинов высокой плотности («хорошего холестерина») в крови на 33% и одновременному повышению липопротеинов низкой плотности («плохого холестерина») на 29%; при этом прибавка веса у тех, кто принимал станозолол примерно совпадала с теми участниками исследования, которые принимали 200 мг тестостерона энантата в неделю[8].

Примечания

Cсылки

Что такое Станозолол и почему он так популярен?

Всё чаще и чаще спортсмены начали «увлекаться» приёмом разнообразных стероидных препаратов. Что вызвало такой ажиотаж до конца понять невозможно. Но остается возможным разобрать как данные препараты влияют на организм и действительно ли они «помогают» спортсменам и людям, увлекающимся спортом.

Одним из известных на сегодня, но запрещенным в профессиональном спорте, препаратом улучшающим метаболизм клеток является Станозолол.

Приобрести данные таблетки в других странах является проблемой, так как существует большое количество подделок. А вот купить Станозолол в Украине https://ukrfarma.in.ua/stanozolol.html достаточно просто, так как «самодельные» фармакологические компании не дошли до того уровня, что бы сделать хотя бы более или менее качественную подделку данного стероида.

Данный препарат является производным дигидротестостерона. Его фармакологическое действие заключается в усилении действия глюкокортикостероидов (гормонов, которые вырабатывает организм). Исследования показали, что Станозолол так же усиливает синтез дезоксирибонуклеиновой кислоты (ДНК) и рибонуклеиновой кислоты (РНК). Соответственно, можно прийти к выводу, что приём данного препарата улучшает метаболизм клеток, улучшает «дыхание» тканей (улучшается насыщение клеток тканей кислородом), способствует укреплению костей, путём накапливания и удержания Кальция внутри котной структуры.

Данный препарат есть весьма полезен для организма. Помимо выше описанных его основных действий, об этом очень «ярко» говорит его запрет среди профессиональных спортсменов (этот препарат считается допингом). Исходя из этого, можно сделать вывод что препарат, помимо улучшения метаболизма и трофики тканей и клеток организма, повышает выносливость, уменьшает жировые отложения и способствует быстрому наращиваю качественной мышечной массы.

Станозолол так же применяется как лечебное средство. Показаниями к применению данного препарата являются: нарушения синтеза белков, мышечная дистрофия, заболевания щитовидной железы, различные травмы, до- и послеоперационный период, различные формы анемии, остеопороз, восстановление после заболеваний и так далее. Но стоит помнить, что, как и других лекарственных препаратов, у Станозолола есть противопоказания. К ним относятся повышенная чувствительность в любому из составляющих препарата, болезни сердца (атеросклероз, ИБС), печеночная и почечная недостаточность, рак, возраст до 18 лет, период беременности и кормления грудью, а так же острый и хронический простатит.

Так как Станозолол это названия действующего вещества, то не стоит удивляться тому, что название самого препарата будет несущественно, но всё-таки отличаться. Наиболее проверенными в подлинности являются препараты, которые носят такие названия: Становер (производитель Vermodje), Стромбафорт (производитель Balkan Pharmaceuticals), Станабол 10 (производитель British Dispensary), а так же Стромбагед (производитель Golden Dragon). Станозолол данных производителей, а так же другие препараты относящиеся к стероидам можно купить на https://ukrfarma.in.ua/.

Зачем спортсмены принимают станозолол? — Сахалин и Курилы — SKR.SU

Станозолол – это анаболический стероид, производное дигидротестостерона. Он относится к гормонам, являющимся антагонистами прогестерона, который активно вырабатывается в организме женщины во время беременности.

Препарат относится к медицинским средствам и не разрешен для использования в спорте. Он признан допингом, и при обнаружении в организме спортсмена дисквалифицируют.

Однако он достаточно широко используется любителями–бодибилдерами, так как способствует активному наращиванию мышечной массы и формированию красивого, рельефного тела. Также это средство способствует улучшению самочувствия и увеличению силы, энергии, что помогает в более интенсивных тренировках.

При использовании препарата нужно учитывать риски побочных эффектов. Чтобы этого не произошло, следует правильно рассчитывать дозировки, не превышать их и следить за самочувствием во время терапии.

Показания к применению

Станозолол используется для лечения следующих патологий и заболеваний:

  • Кахексия – сильное истощение организма разного происхождения с уменьшением мышечной массы и слабостью.
  • Дистрофия.
  • Нарушение синтеза белков в организме.
  • Травмы разного типа.
  • Ожоги.
  • Остеопороз.
  • Разные виды анемии.
  • Базедова болезнь (гипертиреоз).
  • Нарушения азотного баланса в организме при лечении кортикостероидами.
  • Перед и после оперативных вмешательств.
  • После длительных тяжелых заболеваний, инфекционных болезней.
  • При использовании лучевой терапии.

В бодибилдинге этот препарат используется с целью наращивания мышечной массы и получения более рельефного, выразительного тела. Это связано с тем, что станозолол стимулирует выработку и усвоение белка, являющегося основным «строительным материалом» мышц.

Перед использованием препарата необходимо внимательно изучить инструкцию к применению и проконсультироваться у лечащего врача. Особенно важно сделать это при наличии различных заболеваний, включая хронические и аутоиммунные.

Поскольку побочных эффектов много и все они несут угрозу здоровью человека, при использовании станозолола необходим постоянный врачебный контроль.

станозолол повышает тестостерон

станозолол повышает тестостерон

Поисковые запросы: яйца тестостерон, заказать станозолол повышает тестостерон, Где в Сургуте купить Testonormin.

станозолол повышает тестостерон

ярина при повышенном тестостероне, повысить тестостерон у мужчины народными, Где в Новочебоксарске купить Testonormin, уровень тестостерона после 50, у мужа повышен тестостерон

повышенный фсг низкий тестостерон

уровень тестостерона после 50 Станозолол (или Винстрол, как его называют в торговой среде) – это слабый стероид. Слабый в плане возможностей для увеличения мышечной массы спортсменов, которые его принимают, но в то же время и очень. Станозолол по праву считается одним из самых популярных стероидов. Станозолол – это один из наиболее старых анаболических препаратов, который. Станозолол повышает кровяное давление. И Станозолол – не исключение. Во время его курса продукция тестостерона падает и восстанавливается потом в течение нескольких месяцев. Отзывы о первом курсе. — Я сушился. Побочные эффекты Винстрола (Станозолола): подавление тестостерона. Станозолол изначально был описан как препарат для различного медицинского. Винстрол торговая марка химического вещества станозолол (дериват дигидротестостерона). Станазолол выпускается и в оральной форме. Рассмотрим Курс Станозолола (Stanozolol, Стан, станаза, станазолол, винстрол) для начинающих. Если вы хотите подсушиться, то Станозолол (Винстрол) – это отличный выбор. Большинство экспертов. Тестостерон Станозолол курс на сухую массу и силу. Сегодня все большую популярность среди спортсменов приобретают комбинированные курсы стероидов, способные решить много задач сразу. Одним из таких является. Тестостерон пропионат — главный препарат на основании которого построен курс. Короткий эфир с периодом активности около 3х дней. Включается в работу в течение дня после укола.Пропионат (пропик) – один из самых популярных. В магазине стероидов Mensgen курс тестостерон пропионат + станозолол по лучшей цене. Схема приема и консультации бесплатно. Доставка по РФ. у мужа повышен тестостерон потенция тестостерон повышает повысить тестостерон у мужчины в домашних условиях

увеличение уровня тестостерона повышенный фсг низкий тестостерон препараты снижающие тестостерон яйца тестостерон Где в Сургуте купить Testonormin ярина при повышенном тестостероне повысить тестостерон у мужчины народными Где в Новочебоксарске купить Testonormin

В упаковку входит 30 пластырей, каждый из них имеет идеальную долю полезных и необходимых веществ. Урологи утверждают, что чем старше становится мужчина, тем сложнее нормализовать его уровень гормона. Специалисты рекомендуют пользоваться товаром для профилактики в любом возрасте. Молодым парням при нехватке собственных гормонов также можно пользоваться продуктом, делая перерывы между курсами в полгода. За этот период почувствовал значительные улучшения. Нормализовалось либидо, повысилась сексуальная активность, наладилась эрекция. Сейчас прежних проблем интимного характера нет. В реальных отзывах о средстве Testonormin для повышения эрекции многие пишут, что препарат подарил им возможность вновь ощутить себя настоящим мужчиной. Причём его положительное влияние они смогли ощутить уже после первого-второго применения. Секрет такой результативности заключается в том, что средство содержит чистый тестостерон. Он быстро проникает через барьер из кожи и соединительной ткани, и попадает прямо в кровь. Это помогает веществу усвоиться намного быстрее, чем, если бы принимать его традиционным пероральным способом. При этом препарат стимулирует процессы в организме, ответственные за производство естественного тестостерона Подобное воздействие обеспечивает нормализацию функций половой сферы и избавляет от всех нарушений потенции. Почему количество тестостерона с возрастом падает? Потому что в крови появляется особый белок, связывающий половые гормоны, что и приводит к уменьшению тестостерона. Развивается состояние, которое на языке. Мужские половые гормоныандрогены только тогда работают правильно, когда содержатся в организме в определённом количестве. Норма тестостерона у мужчин в крови величина непостоянная, показатели. Тестостерон – пожалуй, главный половой гормон, за уровнем которого каждый представитель сильного пола должен следить пристально. Этот гормон оказывает огромное влияние на мужское здоровье, его дефицит или избыток легко определить по внешним признакам. Сколько тестостерона нужно мужчине. Зачем нужен тестостерон. Почему объем тестостерона с годами снижается. С возрастом в крови возникает особый белок, который связывает половые гормоны, что и провоцирует. У женщин нормальный уровень общего количества тестостерона составляет от 20 до 50 нг/дл,. Поэтому женщинам нужно очень немного тестостерона, чтобы стимулировать их либидо (Bankroft, 1984; Crenshaw, 1996). То есть вам мало, нужно повышать. Карта сайта. Вы находитесь Сколько же тестостерона достаточно для активной жизни мужчины? Тестостерон – гормон, отвечающий за формирование мужского телосложения, тембра голоса, оволосения, за половое влечение, сексуальное поведение, спермообразование. Нормальное количество главного мужского.

станозолол повышает тестостерон

препараты снижающие тестостерон

Многие мужчины, которые уже успели оценить Testonormin, убедились в его высокой эффективности. Они отмечают повышение жизненного тонуса и улучшение потенции. Отдельного внимания заслуживает тот факт, что тестостероновый пластырь не вызывает привыкания и возникновения побочных эффектов. Противозачаточные средства не принимала никогда,но знаю, что ярина таковым является.Вопрос: Отзовитесь девочки кто принимал?в каком случае?может есть те кому. Вступить. Противозачаточные таблетки при повышенном тестостероне. При повышенном тестостеронеЯрина? Екатерина Все записи. Повышенный тестостерон у женщин: как понизить без гормонов и таблеток с помощью народных средств и диеты?. Таблетки при повышенной концентрации. В зависимости от показаний и состояния пациентки врач назначает препараты. Диане35 – гормональное средство, оральный контрацептив. Содержание. 1 Способы нормализации повышенного уровня. 2 За что отвечает тестостерон в организме женщины? 3 Побочные эффекты орального контрацептива! КАК СНИЗИТЬ УРОВЕНЬ ТЕСТОСТЕРОНА.ПОХУДЕТЬ!?Прощайте,ужасные прыщи и жирная кожа головы!ФОТО. Так вот,тьфутьфутьфу, со всеми гормонами все в порядке кроме того самого пресловутого тестостерона.К слову сказать я и так об этом догадывалась с 13 лет мучилась с акне,уродующим лицо. Тестостерон – один из основных половых гормонов мужского организма, который отвечает за мужественность. В течение суток, количество тестостерона в крови женщины значительно колеблется – в утреннее время достигает своего пика, и к вечеру постепенно снижается. В норме у прекрасной половины. Противозачаточные и тестостерон. Девочки, нужна ваша помощь. Маммолог мне сказала, что у меня повышен тестостерон. Немного больше волос на руках, чем надо, высыпания на лице периодами, ПМС с резкой сменой настроения. Посоветовала гормональные противозачаточные таблетки на выбор. Народные средства очень эффективны при повышенном тестостероне у женщин, но только в том случае, если процесс. Если гормональные противозачаточные таблетки, их длительный приём привёл к росту уровня тестостерона или если причиной стали препараты для набора мышечной массы, их. При повышенном тестостероне у женщин начинают расти волосы на лице и теле, грубеет голос, выпадают волосы. Для этого назначают противозачаточные таблетки. Контрацептивы снижают тестостерон, устраняют симптомы оволосения по мужскому типу, лечат угревую сыпь. Как снизить тестостерон. Противозачаточные таблетки подавляют тестостерон. Гормоны, содержащиеся в пилюлях, способны связывать в 7. Противозачаточные таблетки повышают риск бесплодия. Разумеется, состояние перманентной беременности иногда притупляет желание организма забеременеть на самом деле. Помимо всего. Гиперандрогению вызывает повышенный уровень тестостерона. Если у вас тестостерон в норме или на нижней границе нормы, то противозачаточные таблетки Джес вам точно НЕ нужны. станозолол повышает тестостерон. потенция тестостерон повышает. Отзывы, инструкция по применению, состав и свойства. Нормы тестостерона у детей. Тестостерон у детей присутствует в крови уже. Именно в период полового созревания тестостерон у мальчиков проявляется во всей красе. Благодаря нему они превращаются в юношей. Тестостерон – один из наиболее важных гормонов в организме человека, за. Нормальные показатели у мальчиков. Измеряется тестостерон в нмоль/л. Норма гормона в крови у мальчиков разных возрастов: До 1 года: 0 – 17,10. Низкий уровень тестостерона у мальчика. Гипогонадизм у мальчиков возникает при снижении выработки тестостерона, нарушении выработки сперматозоидов или отсутствии (пониженной функции) рецепторов к тестостерону. Половое развитие мальчиков не всегда проходит как надо, поэтому. Тестостерон стимулирует развитие вольфовых протоков. К началу 14 недели у плода образуются придатки яичек, семенные пузырьки, семявыносящие. Причины отклонений уровня гормона у мальчиков. Тестостерон – один из наиболее важных гормонов в организме человека, за состоянием которого необходимо тщательно следить, особенно если в семье есть маленький мужчина. Причины отклонений уровня гормона у мальчиков. Тестостерон – один из наиболее важных гормонов в организме человека, за состоянием которого необходимо тщательно следить, особенно если в семье есть маленький мужчина. Норма тестостерон у мальчиков. Только такой отвар запустит РЕГЕНЕРАЦИЮ. Тестостерон, благодаря своей функции, имеет второе название гормон королей и победителей. Связано это с тем, что с возрастом нормальный его. Тестостерон – это гормон, который вырабатывается в половых органах мужчины. В период полового созревания мальчика (в возрасте от 9 до 14 лет), организм начинает вырабатывать больше этого гормона, что ведет к развитию. 2 Тестостерон, предстательная железа и мужчина: как прожить здоровую жизнь. В пубертатном периоде у мальчиков происходит резкий скачок тестостерона, и из недавнего ребенка вырастает юноша. Этот период роста концентрации.

Эффекты от приема Станозолола: показания к применению

Нарастить мышечную массу и увеличить выносливость в короткие сроки – мечта любого спортсмена. Многим в этом помогают дополнительные препараты. Станозолол – один из таких, является анаболическим стероидом и гормональным средством. Его также называют «гормоном беременности».

В медицинских целях препарат назначают при травмах и ожогах, также он помогает при болезни мышц и затяжных инфекциях. Станозолол приписывают пациентам в период до операции и после проведения хирургического вмешательства.

Воздействие препарата

Средство имеет широкий спектр позитивных эффектов на организм атлета:

  • благоприятно воздействует на рост мышц и костей;
  • укрепляет скелет;
  • усиливает здоровый аппетит;
  • влияет на рельефность и венозность;
  • снижает глобулин в организме;
  • активизирует белковый и углеводный обмен;
  • стимулирует анаболические процессы.

Кроме того, с помощью препарата в костях задерживается кальций. Это позитивно влияет на их развитие и рост. Станозолол является противоаллергенным из-за повышенной концентрации С1 фракций.

Препарат можно рекомендовать спортсменам в сфере тяжелой атлетики, так как рост мышц происходит медленно, однако рельефность появляется уже после первых дней приема средства. Продукт помогает в жиросжигании и его принимают непосредственно перед сушкой.

Побочные действия

Перед употреблением препарата обязательно следует обратиться к врачу, чтобы он выписал верную для вас дозировку и назначил правильный курс приема, исходя из физиологических и возрастных особенностей. Также важно помнить обо всех побочных действиях, которые могут повлиять на организм при неправильном приеме Станозолола.

Во время курса могут выпадать волосы и появиться угревая сыпь, акне, прыщи. Возможны повышение артериального давления и появление проблем с сердцем из-за увеличения количества «плохого холестерина» в организме. У женщин передозировка препаратом может привести к вирилизации и нарушению менструального цикла. Стоит бояться развития атеросклероза и нарушения функции печени, болей в костях. Все негативные аспекты использования препарата можно минимизировать понижением дозы.

Противопоказания к применению средства

Медики предупреждают о том, что Станозолол не рекомендуется принимать при повышенной чувствительности к компонентам, при онкозаболеваниях, ишемической болезни сердца. Печеночная и почечная недостаточность также являются причиной отказа от препарата. Запрещено средство во время беременности, кормления грудью и подросткам.

Особенности применения препарата

На рынке фармацевтики Станозолол можно купить в двух видах: таблетках и инъекциях. Последняя форма наиболее популярна среди спортсменов, так как представляет собой суспензию, которую удобно принимать. Во время курса рекомендовано включить в свой рацион витамины, поддерживающие функционирование печени. 

инвитро тестостерон общий

инвитро тестостерон общий

Поисковые запросы: тестостерон 50 лет, где купить инвитро тестостерон общий, почему повышен тестостерон у мужчин.

инвитро тестостерон общий

тестостерон пропионат отзывы, Где в Камышине купить Testonormin, плавание повышает тестостерон, повышенный тестостерон у женщин, тестостерон у мужчин после 60

суспензия тестостерона

повышенный тестостерон у женщин В лаборатории Инвитро вы можете сдать анализ Тестостерон (Testosterone), узнать стоимость исследования в Москве, сроки выдачи результатов с расшифровкой нормы, сколько стоит взятие биоматериала. В лаборатории Инвитро вы можете сдать анализ Свободный тестостерон (Free Testosterone), узнать стоимость исследования в Москве, сроки выдачи. Тестостерон – это основной андрогенный гормон, стероид, который определяет формирование вторичных половых признаков, нормальную половую функцию, половое созревание у мужчин. И хотя данный гормон считается. В Москве процедуру Тестостерон общий можно пройти по 581 адресу. Цены в Москве начинаются от 200р. Средняя цена на Тестостерон общий в Москве 476р. Уважаемая Оксана! Общий тестостерон (тест №64 в Лаборатории ИНВИТРО) состоит из трех фракций гормона — тестостерон свободный (тест №169), и 2 вида связанного тестостерона (с ГСПГ и альбумином). Таким образом,. Уровень тестостерона в крови любого человека является важным показателем. Инвитро, медицинская лаборатория. Москва, Алексеевский, Кулаков переулок, 13. 545 . Независимая лаборатория ИНВИТРО. Лабораторная диагностика в Москве. №169 Свободный тестостерон (Free Testosterone). Описание. Подготовка. Показания. Интерпретация результатов. Тестостерон у мужчин бывает общего и свободного типа. В первом случае речь идет о сумме гормонов в связанном (98% от общего количества) и несвязанном (2% от общего количества) состоянии. При этом имеется 44% гормона. Найти предложения в рубрике Анализ на тестостерон в Москве. Посмотреть стоимость, сравнить цены и выбрать лучшее предложение. тестостерон у мужчин после 60 какие продукты питания повышают тестостерон у мужчин тестостероновый пластырь купит в Воткинске

что нужно употреблять чтобы повысить тестостерон суспензия тестостерона масло тестостерон тестостерон 50 лет почему повышен тестостерон у мужчин тестостерон пропионат отзывы Где в Камышине купить Testonormin плавание повышает тестостерон

Тестостероновые пластыри Тестонормин для мужчин предназначены для обеспечения твердой и продолжительной эрекции, а также улучшения качества сексуальной жизни. Ниже представлен подробный обзор данного средства, состав, способ применения, мнение специалистов, а также информация о том, где купить Testonormin по цене производителя. Сильных скачков гормонального фона не было. Мгновенного улучшения не произошло, более-менее заметные улучшения начали происходить через 1,5 недели. Постоянно использовать пластырь не нужно, я использую один раз в полгода. Привыкания не возникает. Понравились тестостероновые пластыри. Особых проблем в сексе не было, но решил усилить ощущения. Они действительно усилились, стал ощущать себя настоящим мачо, секс стал более грубым, но доставляющим и мне, и партнерше больше удовольствия. Плюс увеличилась продолжительность секса. Могу заниматься полчаса, не кончая и никак себя не контролируя. Партнерша без ума от этих пластырей, как и я. Думаю, буду использовать их частенько. Ведь тестостерон полезен для мужчин. То есть, это средство и приятное, и полезное, что редкость. Сами пластыри сделаны качественно, надежно закрепляются, в них можно даже в ванной заниматься сексом 🙂 Подготовка к сдаче крови. Обычно направление на анализ тестостерона дает гинеколог, андролог, эндокринолог или репродуктолог. Чтобы результаты анализа на уровень тестостерона были точными, нужно заранее подготовиться к исследованию. Нельзя сдавать кровь на тестостерон в течение суток после УЗИ. Когда и как сдавать эти анализы, как подготовиться к сдачи анализов?. Тестостерон – это половой гормон, который считается главным у мужчины. Именно поэтому кровь на тестостерон целесообразно сдавать до 11 часов утра. Количество гормона различно для противоположных полов. Тестостерон – главный мужской гормон, который синтезируется в семенниках, надпочечниках и гипофизе,. Но чтобы исключить нарушение гормонального баланса, врач обязательно направит пациента на сдачу крови на гормоны. Если расшифровка анализа на тестостерон у мужчины будет в норме, то. Анализ на тестостерон у мужчин показания к назначению, правила подготовки. Направление на сдачу анализа дает эндокринолог, при этом контроль за. Анализ крови на тестостерон у мужчин позволяет узнать тип развития определенного пациента. Как сдавать анализ на тестостерон. Анализ на уровень тестостерона — один из важнейших показателей мужского здоровья. Читайте о правильной подготовке к анализу, его интерпретации и дополнительных гормональных обследованиях, повышающих точность диагностики. Правила подготовки к анализу. Перед тем как сдавать анализ на тестостерон, рекомендуется проконсультироваться с врачом. Уровень данного вещества можно выявить в мужском и женском организме с помощью лабораторных исследований. Анализ на тестостерон позволяет своевременно выявить количество этого. В день сдачи анализов на достоверность результата может повлиять даже чай или кофе. Как сдавать? Для проведения исследования используют венозную кровь, на основании которой методом иммуноферментного анализа получают. Дать направление на сдачу крови и объяснить, как к ней подготовиться, могут андролог, эндокринолог или репродуктолог. Кровь на тестостерон берется так же, как и биохимический анализ. Полное исследование и заключение специалиста.

инвитро тестостерон общий

масло тестостерон

Давно искал какое-нибудь простое средство для повышения потенции с травкой, именуемой жгун-корень Моннье. Жил когда-то в Азии и очень хорошо наслышан о ее возможностях. Теги: повышен общий тестостерон, свободный тестостерон в норме а общий тестостерон повышен. По последним данным (сдавала ОБЩИЙ тестостерон, т.. свободный, как пояснила врач, очень сложно выявить в реальной картине): 3й день цикла: Тестостерон общий 0.666 нг/мл (норма 0.084. Это свободный тестостерон, норма которого составляет 2% от общего содержания тестостерона в крови. Если таких фатальных изменений не произошло, то необходимо предусмотреть, что повышенный уровень свободного тестостерона способствует возникновению и развитию воспалительных процессов. Это свободный тестостерон, норма которого составляет 2% от общего содержания тестостерона в крови. Некоторые последствия повышенного гормонального уровня. Если у мужчины наблюдается избыток свободного тестостерона, он становится агрессивным, легко раздражается по незначительным поводам. Общий тестостерон – это суммарное количество в крови трех базовых форм, имеющих отличие в своем влиянии на организм. С другой стороны, показатель свободного тестостерона может быть в норме, а уровень общего — меньше или больше по отношению к референсным (контрольным) значениям. Нормы тестостерона у женщин. Тестостерон свободный у женщин повышен, при условии, что исследования показали результат более 3,78 нмоль/л, когда в норме он должен быть от 0,31 до 3,78, если пациентка находится в репродуктивном возрасте. Свободный тестостерон (норма у женщин на 3 день цикла). Девчули,может кто знает,какой показатель важнее тестостерон общий или тестостерон свободный?. У меня та же проблема свободный выше нормы в 2 раза, а общий на верхней границе нормы. и еще андростендион ооочень высокий, а вот остальные андрогены (ДГЭС, кортизол, ГСПГ) в норме. То же. Какая норма свободного тестостерона у женщин?. Вначале нужен тест на общий тестостерон, при отклонениях врач назначает анализ на ГСПГ. Свободный тестостерон повышен. Причины повышенного тестостерона у женщин: неправильный рацион; прием анаболических стероидов. Смущает конечно одно в вопросе повышен общий, а свободный в норме. Свободный тестостерон отвечает за гормоны, а общий отражает всю картину. Общий включает в себя и свободный. Значит я так думаю если. Причины снижения свободного тестостерона у мужчин. Содержание. 1 Свободный тестостерон: определение и норма. 2 Причины пониженного уровня тестостерона. 3 Симптомы андрогенного дефицита. 4 Как повысить уровень тестостерона? Тестостерон является важней. Свободный тестостерон у мужчин активная фрация гормона. Определяется для оценки функционирования органима. Свободный тестостерон у мужчин одна из фракций гормона. Она обладает наибольшей активностью и взаимодействует с органамимишенями. По ее уровню можно оценить, насколько хорошо. инвитро тестостерон общий. какие продукты питания повышают тестостерон у мужчин. Отзывы, инструкция по применению, состав и свойства. Тестостерон пропионат не только обеспечит андрогенную поддержку, но и защитит суставы от возможного травмирования. Станозолол выводит из организма жидкость, в том числе и из суставов. После использования Станозолола соло. Особо хорошо себя зарекомендовал курс станозолол + тестостерон пропионат. Тестостерон пропионат является андрогенным стероидом, который активно. Описание прохождения. Длительность курса станозолола и тестостерона энантата составляет от 4 до 8 недель. Схема может выглядеть следующим образом: Станозолол — 20 мг дважды в день; Тестостерон энантат — 250 мг. Курс тестостерона: Пропионат и Станозолол. Он помогает устранить излишний. Дозировка в сутки Станозолола и Пропионата — 40 мг и 50–100 мг соответственно. Рецензия к курсу пропионат + станозолол: Курс Тестостерона пропионат + оральный Станозолол это, пожалуй, наиболее эффективная. Отзыв после курса пропионата и станозолола. Пропионат представляет собой тестостерон с коротким действием, обладающий сильным эффектом и высокими. Купить готовый курс стероидов на сухую массу тестостерон пропионат и станозолол. Ознакомиться с отзывами, а также рекомендациями по курсу и ПКТ. Курс Станозолол (Стромбафорт) и Тестостерон пропионат является недорогим, но очень эффективным для набора качественной и сухой мышечной массы. Довольно хорошо подойдет, как новичкам, так и тем атлетам, которые. Тестостерон Пропионат – один из самых востребованных препаратов на основе. Все используемые на курсе Станозолол Тестостерона Пропионат Кленбутерол препараты являются безопасными. Однако превышать.

МЕНЮ "PAPRIKA"

Menu ГлавнаяМЕНЮ "PAPRIKA"Скидки & АкцииФотогалереяНаши точкиВакансии

Cart

Content

Breadcrumb

ФУНЧОЗА С КУРИЦЕЙ

340 ГР

215,10 руб

Скидка:-23,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, куриное филе, соус терияки |

УДОН С КУРИЦЕЙ

350 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша удон, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, куриное филе, соус терияки |

ФУНЧОЗА МОРСКАЯ

340 ГР

229,50 руб

Скидка:-25,50 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, креветка, кальмар, осьминог, мидии, соус терияки |

УДОН МОРСКОЙ

350 ГР

220,50 руб

Скидка:-24,50 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша удон, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, креветка, кальмар, осьминог, мидии, соус терияки |

СОБА С ОВОЩАМИ

390 ГР

184,50 руб

Скидка:-20,50 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, соус терияки |

СОБА С КУРИЦЕЙ

350 ГР

211,50 руб

Скидка:-23,50 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, куриное филе, соус терияки |

СОБА МОРСКАЯ

350 ГР

224,10 руб

Скидка:-24,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, креветка, кальмар, осьминог, мидии, соус терияки |

ФУНЧОЗА С ОВОЩАМИ

380 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша фунчоза, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, соус терияки |

УДОН С ОВОЩАМИ

390 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, лук зелёный, лапша удон, болгарский перец, стручковая фасоль, морковь, кабачок, перец красный, соус терияки |

АГУЭРО

250 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

ТОРТИЛЬЯ, СОУС БУРГЕР, НАГГЕТСЫ, КИТАЙСКАЯ КАПУСТА, ОГУРЕЦ, ПОМИДОР КУБИКОМ |

ХАРДКОР

420 ГР

314,10 руб

Скидка:-34,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Белый Соус, Красный Соус, Две Говяжьи Котлеты, Салат, Лук Красный, Огурец Маринованный, Бекон, Два Ломтика Сыра Чеддер |

НЕЙМАР

250 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

ТОРТИЛЬЯ, СОУС БЕЛЫЙ, КРАСНЫЙ СОУС, НАГГЕТСЫ, КУКУРУЗА, КАРТОФЕЛЬ ФРИ, КИТАЙСКАЯ КАПУСТА, ОГУРЕЦ СОЛЁНЫЙ |

БАРБЕКЮ

285 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Белый Соус, Барбекю Соус, Говяжья Котлета, Огурец Маринованный, Лук Фри, Салат, Ломтик Сыра Чеддер |

ФРЭДДИ

310 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Бургер Соус, Говяжья Котлета, Салат, Картофель Фри, Огурец Маринованный, Сыр Чеддер |

БУФФОН

215 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

ТОРТИЛЬЯ, БРУСНИЧНЫЙ СОУС, КИСЛО-СЛАДКИЙ СОУС, ГОВЯДИНА, ЧЕДДЕР, ОГУРЕЦ МАРИНОВАННЫЙ, КИТАЙСКАЯ КАПУСТА |

КЛАССИКА

300 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Бургер Соус, Говяжья Котлета, Салат, Томат Кубиком, Огурец Маринованный, Сыр Чеддер |

САНЧЕС

255 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

ТОРТИЛЬЯ, БЕЛЫЙ СОУС, КРАСНЫЙ СОУС, ОСТРЫЙ СОУС, ГОВЯДИНА, КУКУРУЗА, ПОМИДОР КУБИКОМ, КИТАЙСКАЯ КАПУСТА, ХАЛАПЕНЬО |

РАЙЛИ РИД

315 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Брусничный Соус, Говяжья Котлета, Томат Кубиком, Огурец Свежий, Сыр Чеддер |

РОДРИГЕС

240 ГР

143,10 руб

Скидка:-15,90 руб

Вес/Кол-во

ТОРТИЛЬЯ, БЕЛЫЙ СОУС, КРАСНЫЙ СОУС, ОСТРЫЙ СОУС, ГОВЯДИНА, КУКУРУЗА, МОРКОВЬ ПО-КОРЕЙСКИ |

ДЭННИ ДИ

305 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Белый Соус, Красный Соус, Говяжья Котлета, Бекон, Красный Лук, Огурец Маринованный, Два Ломтика Сыра Чеддер |

БИФФ ЭГС

300 ГР

197,10 руб

Скидка:-21,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Белый Соус, Красный Соус, Говяжья Котлета, Луковые Кольца в Панировке, Яйцо |

ДЖЕЙСОН

270 ГР

170,10 руб

Скидка:-18,90 руб

Вес/Кол-во

Фирменная Булочка, Красный Соус, Кисло-Сладкий Соус, Говяжья Котлета, Лук Фри, Огурец Маринованный, Сыр Чеддер |

МАКИ ХОТ: креветка

8 ШТ | 195 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

Нори, японский рис, огурец, соус спайси, креветка |

ВЕЗУВИЙ: ЛОСОСЬ

8 ШТ | 190 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

сыр моцарелла, соус лава, японский рис, нори, досось |

СЕРДЦЕ САМУРАЯ

8 ШТ | 230 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, жареное филе акулы, огурец, кунжут, сыр сливочный, соус сырный, соус унаги |

АЗУМИ

8 ШТ | 195 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, соус лава, сыр моцарелла, японский рис, нори, огурец, цыплёнок |

ПРОКСИМА

8 ШТ | 190 ГР

125,10 руб

Скидка:-13,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, краб |

МАКИ ХОТ: КРАБ

8 ШТ | 195 ГР

139,50 руб

Скидка:-15,50 руб

Вес/Кол-во

Нори, японский рис, огурец, соус спайси, краб |

ЦЫПА

8 ШТ | 195 ГР

143,10 руб

Скидка:-15,90 руб

Вес/Кол-во

ХРУСТЯЩИЙ ЛУК ФРИ, японский рис, нори, огурец, СЫР МОЦАРЕЛЛА, СОУС ЛАВА, цыпленок |

Э Ю Ё

8 ШТ | 200 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

Соус Унаги, Сливочный Сыр, Семечки Подсолнуха, Темпура, Японский Рис, Нори, Сойс Спайси, Огурец |

ЦЕЗАРЬ ХОТ

8 ШТ | 205 ГР

134,10 руб

Скидка:-14,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, сухари, японский рис, нори, огурец, помидор, салат, соус цезарь, цыпленок |

ТЕМПУРА

8 ШТ | 200 ГР

134,10 руб

Скидка:-14,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, имбирь, огурец, снежный краб, кунжут, соус унаги |

КАЛИФОРНИЯ ХОТ: лосось

8 ШТ | 220 ГР

269,10 руб

Скидка:-29,90 руб

Вес/Кол-во

соус лава, моцарелла, масаго, японский рис, нори, огурец, лосось |

МАКИ ХОТ: ЛОСОСЬ

8 ШТ | 195 ГР

197,10 руб

Скидка:-21,90 руб

Вес/Кол-во

Нори, японский рис, огурец, соус спайси, лосось |

ГОРЯЧАЯ МИЛЯ

8 ШТ | 195 ГР

197,10 руб

Скидка:-21,90 руб

Вес/Кол-во

СВЕЖИЙ УКРОП, Нори, японский рис, огурец, соус спайси, ЛОСОСЬ |

ХОТ КРАБ

8 ШТ | 205 ГР

134,10 руб

Скидка:-14,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, сухари, японский рис, нори, огурец, сливочный сыр, краб |

ТЕМПУРА ЛОСОСЬ

8 ШТ | 230 ГР

233,10 руб

Скидка:-25,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, жареное филе лосося, сыр сливочный, лук фри, соус сырный, кунжут, соус унаги |

ИТАЛЬЯНСКИЙ

8 ШТ | 195 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

СЫР ЧЕДДЕР, японский рис, нори, ПОМИДОР, СЛИВОЧНЫЙ СЫР, цыпленок |

ХОТ КРЕВЕТКА

8 ШТ | 205 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, сухари, японский рис, нори, огурец, сливочный сыр, креветка |

ШАЗАМ! : КРАБ

8 ШТ | 230 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

Соус Унаги, Сливочный Сыр, Семечки Подсолнуха, Темпура, Японский Рис, Нори, Сойс Спайси, Огурец, Краб |

ВЕЗУВИЙ: КРАБ

8 ШТ | 190 ГР

130,50 руб

Скидка:-14,50 руб

Вес/Кол-во

сыр моцарелла, соус лава, японский рис, нори, краб |

МАКИ ХОТ: цыплёнок

8 ШТ | 195 ГР

139,50 руб

Скидка:-15,50 руб

Вес/Кол-во

Нори, японский рис, огурец, соус спайси, цыплёнок |

ГОРЯЧАЯ МЕКСИКА

8 ШТ | 195 ГР

233,10 руб

Скидка:-25,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, СУХАРИ, МЕКСИКАНСКАЯ ТОРТИЛЬЯ, СОУС СПАЙСИ, ПОМИДОР, огурец, СЫР СЛИВОЧНЫЙ, цыпленок |

ХОТ ЛОСОСЬ

8 ШТ | 205 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, сухари, японский рис, нори, огурец, сливочный сыр, лосось |

ШАЗАМ! : ЛОСОСЬ

8 ШТ | 230 ГР

224,10 руб

Скидка:-24,90 руб

Вес/Кол-во

Соус Унаги, Сливочный Сыр, Семечки Подсолнуха, Темпура, Японский Рис, Нори, Сойс Спайси, Огурец, Лосось |

ВЕЗУВИЙ: КРЕВЕТКА

8 ШТ | 190 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

сыр моцарелла, соус лава, японский рис, нори, креветка |

ЗАПЕЧЁННЫЙ АРИКАМИ

8 ШТ | 210 ГР

148,50 руб

Скидка:-16,50 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, снежный краб, помидор, кунжут, соус сырный, соус унаги |

ХОККАЙДО

8 ШТ | 195 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

хрустящий лук фри, японский рис, нори, огурец, сыр моцарелла, соус лава, краб |

АЛЬСАФИ

8 ШТ | 195 ГР

125,10 руб

Скидка:-13,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, японский рис, нори, огурец, соус спайси, цыпленок |

ШАЗАМ! : ЦЫПЛЁНОК

8 ШТ | 230 ГР

166,50 руб

Скидка:-18,50 руб

Вес/Кол-во

Соус Унаги, Сливочный Сыр, Семечки Подсолнуха, Темпура, Японский Рис, Нори, Сойс Спайси, Огурец, Цыплёнок |

МАКИ ХОТ: КРЕВЕТКА

8 ШТ | 195 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

Нори, японский рис, огурец, соус спайси, КРЕВЕТКА |

ВЕЗУВИЙ: ЦЫПЛЕНОК

8 ШТ | 190 ГР

130,50 руб

Скидка:-14,50 руб

Вес/Кол-во

сыр моцарелла, соус лава, японский рис, нори, цыпленок |

ЗАПЕЧЁННЫЙ РАССВЕТ

8 ШТ | 220 ГР

157,50 руб

Скидка:-17,50 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, снежный краб, огурец, кунжут, соус лава, соус унаги |

НЭМО

8 ШТ | 195 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

хрустящий лук фри, японский рис, нори, огурец, сыр моцарелла, соус лава, лосось |

ЦЕЗАРЬ ХОТ: лосось

8 ШТ | 205 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, сухари, японский рис, нори, огурец, помидор, салат, соус цезарь, лосось |

СИРИУС

8 ШТ | 195 ГР

116,10 руб

Скидка:-12,90 руб

Вес/Кол-во

кляр, японский рис, нори, огурец, соус спайси, ветчина |

КИОТО

8 ШТ | 240 ГР

260,10 руб

Скидка:-28,90 руб

Вес/Кол-во

соус лава, моцарелла, масаго, японский рис, нори, огурец, КРЕВЕТКА |

ФИЛАДЕЛЬФИЯ СПЕШЛ ХОТ

8 ШТ | 195 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, соус лава, сыр моцарелла, японский рис, нори, огурец, лосось |

ФРИ МИКС

150 ГР + соус

179,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

луковые кольца | картофель фри | картофельные дольки |

KING КОМБО

6 ПОЛОВИН | 3 ШТ | 1920 ГР

949,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

|30СМ 1/2| 4ЕТЫРЕ СЫРА, |30СМ 1/2| БАРБЕКЮ, |30СМ 1/2| АМСТЕРДАМ, |30СМ 1/2| ВЕТЧИНА И ГРИБЫ, |30СМ 1/2| КЛАССИКА, |30СМ 1/2| ПАПРИКА |

СЕТ: КОРОЛЕВА

24 ШТ | 635 ГР

559,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

ФИЛАДЕЛЬФИЯ ЛАЙТ, КАЛИФОРНИЯ ХОТ: СНЕЖНЫЙ КРАБ, ЦЕЗАРЬ ХОТ |

СЕТ: Теплота

24 ШТ | 650 ГР

479,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Цезарь хот, Шазам!: краб, Хот лосось |

СЕТ: ЗАПЕЧЕННЫЙ

40 ШТ | 1200 ГР

899,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Калифорния хот: снежный краб, Везувий: креветка, Везувий: цыплёнок, Везувий: тунец, Маки хот: краб, Маки хот: лосось |

КОМБО КЛАССИКА

2 ШТ + 2 Coca | 1035 ГР + 0.66Л

499,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

|25СМ| 4ЕТЫРЕ СЫРА, |25СМ| КЛАССИКА, + 2 шт Сoca-Сola 0,33l жб |

СЕТ: Радость

24 ШТ | 620 ГР

530,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Филадельфия: лайт, Шазам!: цыплёнок, Годзилла чиз |

СЕТ: ЗАБОТА

24 ШТ | 590 ГР

399,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Маки хот: краб, Везувий: цыплёнок, Хот краб |

СЕТ: ФИЛАДЕЛЬФИЯ

24 ШТ | 700 ГР

599,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Филадельфия Чиз, Филадельфия Спешл, Филадельфия Спешл Хот |

СЕТ: OSIRIS [осирис]

48 ШТ | 1200 ГР

899,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

маки хот лосось, маки ветчина, маки лосось, маки хот цыплёнок, маки хот краб, маки краб |

СЕТ: FAMILY [семейный]

80 ШТ | 2090 ГР

1849,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Калифорния хот: снежный краб, Везувий: креветка, Маки хот: цыплёнок, Цезарь хот, Сириус, Шазам!: цыплёнок, Золотой краб, Калифорния: лосось, Ниндзя, Филадельфия |

KILLFISH КОМБО

16 Ролл + Пицца |30СМ|

559,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Пицца: Ветчина и грибы 30см | 610гр Роллы: Маки краб 8шт | 175гр, Филадельфия спешл 8шт | 180гр |

СЕТ: Счастье

20 ШТ | 415 ГР

449,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Филадельфия спешл хот 1/2, Нэмо 1/2, Калифорния чиз 1/2, Филадельфия 1/2 |

СЕТ: Нежность

24 ШТ | 590 ГР

389,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Цезарь хот, Везувий: цыплёнок, Альсафи |

СЕТ: УЛЫБКА

24 ШТ | 735 ГР

729,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Байши Чиз, Калифорния Чиз, Филадельфия Чиз |

СЕТ: Море

24 ШТ | 635 ГР

539,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Калифорния хот: снежный краб, Хот лосось, Везувий: краб |

СЕТ: ГОРЯЧИЙ

40 ШТ | 1030 ГР

749,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Цезарь хот, Хот лосось, Альсафи, Проксима, Шазам!: цыплёнок |

СЕТ: СТУДЕНТКА

64 ШТ | 1720 ГР

949,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Сириус, Везувий: цыплёнок, Альсафи, Маки: ветчина, Сахалин, Проксима, Маки: краб, Везувий: краб Васаби, Имбирь, Соевый соус, Палочки для ролл |

СЕТ: ПОСЛЕДНИЙ САМУРАЙ

56 ШТ | 1560 ГР

1249,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Зеленая миля, Фокус, Темпура лосось, Сердце самурая, Норвежский, Пёрл-харбор, Шазам!: цыплёнок |

ЗАПЕЧЁННЫЙ СЕТ: НАПАЛМ

32 ШТ | 815 ГР

659,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Калифорния хот: снежный краб, Везувий: краб, Филадельфия спешл хот, Везувий: Цыплёнок | |

СЕТ: КАЛИФОРНИЯ

24 ШТ | 630 ГР

649,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

калифорния креветка калифорния лосось калифорния краб + васаби, имбирь соевый соус |

LIKE КОМБО

3 ШТ | 1525 ГР

649,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

|25СМ| 4ЕТЫРЕ СЫРА, |25СМ| ВЕТЧИНА И ГРИБЫ, |25СМ| ГАВАЙСКАЯ |

СЕТ: Ласка

24 ШТ | 590 ГР

579,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

Везувий: лосось, Хот лосось, Маки хот: лосось |

СЕТ: ЗВЕЗДА

24 ШТ | 580 ГР

449,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

НОРВЕЖСКИЙ, ЦЫПА, АЛЬСАФИ |

СЕТ: ГОРЯЧАЯ КАЛИФОРНИЯ

24 ШТ | 720 ГР

659,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

калифорния хот лосось калифорния хот креветка калифорния хот краб + васаби, имбирь соевый соус |

BON AQUA 0.5 (газ)

1 ШТ | 0.5 L

59,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

BON AQUA 0.5 (газированная) |

COCA-COLA 0.33

1 ШТ | 0.33 L

59,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

COCA-COLA 0.33L |

BON AQUA 0.5 (негаз)

1 ШТ | 0.5 L

59,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

BON AQUA 0.5 (негазированная) |

COCA-COLA 0.9

1 ШТ | 0.9 L

99,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

COCA-COLA 0.9L |

СОК ДОБРЫЙ 0.33

1 ШТ | 0.33 L | Яблоко

59,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

СОК ДОБРЫЙ 0.33Л Яблоко |

НЕКТАР ДОБРЫЙ 0.33

1 ШТ | 0.33 L | Мультифрукт

59,00 руб

Скидка:

Вес/Кол-во

НЕКТАР ДОБРЫЙ 0.33Л Мультифрукт |

БОРУССИЯ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, томатный соус пепперони, сыр моцарелла, лук красный, огурец маринованный |

ГРИБНАЯ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус Ранч, сыр моцарелла, шампиньоны |

МАМБА!

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус ранч, цыпленок, ветчина, ананас, сыр моцарелла, кисло-сладкий соус |

ВЕТЧИНА И ГРИБЫ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус томатный, шампиньоны, ветчина, сыр моцарелла |

ДАБЛ ПЕППЕРОНИ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус томатный, пепперони, сыр моцарелла, лук красный, перец красный, паприка |

ГАВАЙСКАЯ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус Ранч, ветчина, ананас, сыр моцарелла |

КЛАССИКА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус томатный, пепперони, ветчина, шампиньоны, помидоры, сыр моцарелла |

МЕКСИКА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, томатный соус, перец халапеньо, перец болгарский, помидоры, кукуруза, цыплёнок, сыр моцарелла |

МИНОТАВР

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, томатный соус, ветчина, сыр моцарелла, лук красный, паприка |

МАРГАРИТА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус томатный, помидоры, прованские травы, сыр моцарелла |

РАНЧО

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус Ранч, цыплёнок, ветчина, помидор, сыр моцарелла, соус Ранч |

4ЕТЫРЕ СЕЗОНА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

ВЕТЧИНА И ГРИБЫ + ПЕППЕРОНИ + 4ЕТЫРЕ СЫРА + МАРГАРИТА |

АМСТЕРДАМ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус томатный, шампиньоны, ветчина, сыр моцарелла, помидоры, красный лук |

ПАПРИКА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус томатный, бекон, пепперони, ветчина, сыр моцарелла |

БАРБЕКЮ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус Ранч, лук красный, цыплёнок, шампиньоны, сыр моцарелла, соус BBQ |

ВЕТЧИНА И СЫР

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус ранч, ветчина, сыр моцарелла |

ПЕППЕРОНИ ХОТ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус томатный, пепперони, сыр моцарелла, лук красный, паприка |

ПОСЕЙДОН

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус томатный, креветки, кальмар, мидии, осьминог, маслины, сыр моцарелла |

ЧИЗБУРГЕР

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус томатный, бекон, цыплёнок, болгарский перец, огурец, сыр моцарелла, горчица, красный соус |

СЛАДКАЯ ЦЫПА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, сыр моцарелла, томатный соус, цыплёнок, ветчина, кисло-сладкий соус |

ИТАЛИЯ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, соус томатный, шампиньоны, пепперони, сыр моцарелла, маслины, орегано |

СЫРНАЯ

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, томатный соус, сыр моцарелла, чеснок |

4ЕТЫРЕ СЫРА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

фирменное тесто, соус ранч, сыр фета, сыр чеддер, сыр дор блю, сыр моцарелла |

СЫРНАЯ ЦЫПА

ВЫБЕРИ РАЗМЕР

0,90 руб

Скидка:-0,10 руб

Вес/Кол-во

Фирменное тесто, сыр моцарелла, томатный соус, цыплёнок, томаты, сырный соус |

КАЛИФОРНИЯ ЧИЗ

8 ШТ | 210 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец |

НИНДЗЯ

8 ШТ | 170 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

нори, японский рис, сливочный сыр, помидор, краб, креветка, красная икра |

ФИЛАДЕЛЬФИЯ

8 ШТ | 225 ГР

323,10 руб

Скидка:-35,90 руб

Вес/Кол-во

лосось, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец |

КАЛИФОРНИЯ: ЛОСОСЬ

8 ШТ | 210 ГР

260,10 руб

Скидка:-28,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, лосось |

ФИЛАДЕЛЬФИЯ СПЕШЛ

8 ШТ | 180 ГР

170,10 руб

Скидка:-18,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, лосось |

ЗОЛОТОЙ КРАБ

8 ШТ | 200 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

сыр чеддер, японский рис, нори, сливочный сыр, помидор, краб |

МЕХИКО

8 ШТ | 180 ГР

233,10 руб

Скидка:-25,90 руб

Вес/Кол-во

мексиканская тортилья, соус спайси, болгарский перец, огурец, сыр сливочный, цыпленок |

КАЛИФОРНИЯ ХИТ

8 ШТ | 190 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, снежный краб |

СЕЗАМ

8 ШТ | 180 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

кунжут, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, краб |

GOLDEN

8 ШТ | 200 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

сыр чеддер, японский рис, нори, сливочный сыр, помидор, цыпленок |

ФОКУС

8 ШТ | 220 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, цыплёнок, помидор, сыр моцарелла, кунжут, сыр сливочный, соус унаги |

МАКИ КРАБ

8 ШТ | 175 ГР

134,10 руб

Скидка:-14,90 руб

Вес/Кол-во

нори, японский рис, сливочный сыр, огурец, краб |

КАЛИФОРНИЯ ЛАЙТ

8 ШТ | 190 ГР

143,10 руб

Скидка:-15,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец |

ГОДЗИЛЛА

8 ШТ | 200 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

лук фри, японский рис, нори, сливочный сыр, масаго, помидор, цыпленок |

ФИЛАДЕЛЬФИЯ ЧИЗ

8 ШТ | 220 ГР

323,10 руб

Скидка:-35,90 руб

Вес/Кол-во

лосось, японский рис, нори, сливочный сыр |

ЗЕЛЁНАЯ МИЛЯ

8 ШТ | 170 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

свежий укроп, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, лосось |

ШАНХАЙ

8 ШТ | 205 ГР

161,10 руб

Скидка:-17,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, жареное филе акулы, огурец, кунжут, соус спайси |

НОРВЕЖСКИЙ

8 ШТ | 190 ГР

179,10 руб

Скидка:-19,90 руб

Вес/Кол-во

нори, японский рис, сливочный сыр, огурец, лосось |

БАЙШИ

8 ШТ | 205 ГР

314,10 руб

Скидка:-34,90 руб

Вес/Кол-во

королевская креветка, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, лосось |

ГОДЗИЛЛА ЧИЗ

8 ШТ | 200 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

лук фри, японский рис, нори, сливочный сыр, масаго, помидор, |

ЦЕЗАРЬ

8 ШТ | 185 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

сыр пармезан, японский рис, нори, салат, соус цезарь, помидор, цыпленок |

КАЛИФОРНИЯ: КРАБ

8 ШТ | 210 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, краб |

ФИЛАДЕЛЬФИЯ ЛАЙТ

8 ШТ | 190 ГР

206,10 руб

Скидка:-22,90 руб

Вес/Кол-во

лосось, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец |

МАКИ ВЕТЧИНА

8 ШТ | 175 ГР

116,10 руб

Скидка:-12,90 руб

Вес/Кол-во

нори, японский рис, сливочный сыр, ветчина |

БАЙШИ ЧИЗ

8 ШТ | 205 ГР

251,10 руб

Скидка:-27,90 руб

Вес/Кол-во

королевская креветка, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец |

ПЕРЛ-ХАРБОР

8 ШТ | 190 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, сливочный сыр, ананас, цыпленок, белый соус |

КАЛИФОРНИЯ: КРЕВЕТКА

8 ШТ | 210 ГР

269,10 руб

Скидка:-29,90 руб

Вес/Кол-во

икра масаго, японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, креветка |

МАКИ ЛОСОСЬ

8 ШТ | 170 ГР

188,10 руб

Скидка:-20,90 руб

Вес/Кол-во

нори, японский рис, сливочный сыр, огурец, лосось |

САХАЛИН

8 ШТ | 190 ГР

134,10 руб

Скидка:-14,90 руб

Вес/Кол-во

свежий огурец, японский рис, нори, сливочный сыр, краб |

ЭВА КРАБ

8 ШТ | 190 ГР

152,10 руб

Скидка:-16,90 руб

Вес/Кол-во

японский рис, нори, сливочный сыр, огурец, краб, белый соус |

Sidebar

PAPRIKA | PADOMA.RU
ГРИЛЬ БАР БЫСТРОГО ПИТАНИЯ
ул.Плеханова, 11/3 (11/4)               8(86132)7-25-25
WhatsUP|Viber|Telegram    8(965)45-7-25-25

Мы в социальных сетях

Дизайн и разработка принадлежит студии Дениса Льдокова. Все права защищены.

Что такое станозолол? | Антидопинговое агентство США (USADA)

Станозолол - синтетический стероид, производный от тестостерона, обладающий анаболическими и андрогенными свойствами. Впервые он появился на рынке в 1962 году. Со временем маркетинг и маркировка станозолола были изменены из-за требований FDA и изменений на рынке лекарств. В 2010 году он был снят с рынка США. Он классифицируется как контролируемое вещество из Списка III в соответствии с федеральным законодательством в соответствии с Законом о контроле над анаболическими стероидами 2004 года и обновленным Законом о контроле над дизайнерскими анаболическими стероидами 2014 года.

Станозолол можно вводить перорально или внутримышечно. Некоторые из его терапевтических применений включают лечение апластической анемии и наследственного ангионевротического отека. Он также был показан в качестве дополнительной терапии для лечения различных других заболеваний, таких как сосудистые нарушения и нарушение роста. Побочные эффекты станозолола включают те, которые обычно связаны с анаболическими стероидами, такие как нарушения менструального цикла, угри, атрофия груди у женщин и импотенция, атрофия яичек, гипертрофия простаты у мужчин.Риски сердечных приступов, инсультов, поражения печени и психических расстройств могут возникать у обоих полов.

Этот препарат был впервые запрещен в спорте Международным олимпийским комитетом и Международной федерацией легкой атлетики (ИААФ) в 1974 году. Его заметный след в истории спорта пришелся на 1988 год, когда канадский спринтер Бен Джонсон дал положительный результат на станозолол на Олимпийских играх. лишился золотой медали на дистанции 100 метров.

Станозолол запрещен Всемирным антидопинговым агентством и включен в Запрещенный список анаболических агентов как вещество, которое запрещено во все времена.Метаболиты станозолола в моче могут быть обнаружены такими методами, как газовая хроматография-масс-спектрометрия (ГХ-МС) и тандемная масс-спектрометрия жидкостной хроматографии (ЖХ-МС / МС). Согласно Всемирному антидопинговому кодексу 2015 года, спортсмены-олимпийцы и паралимпийцы с положительным результатом на станозолол потенциально могут столкнуться с четырехлетним запретом на занятия спортом за умышленное нарушение.

Спортсмены несут ответственность за то, что они вкладывают в свое тело. Пищевые добавки и другие продукты могут иметь неправильную маркировку, которая неверно отражает содержащиеся в них ингредиенты.В прошлом исследования некоторых пищевых добавок показали, что они содержат запрещенные вещества, включая анаболические стероиды, такие как станозолол. Эти анаболические стероиды не были специально указаны производителем на этикетке пищевых добавок. Также было показано, что поливитаминные продукты содержат анаболические стероиды, такие как станозолол. Потребление поливитаминов с перекрестным загрязнением может привести к непреднамеренному положительному результату тестов, и, следовательно, спортсмены должны всегда знать, какие вещества они потребляют.

Сайт

USADA Supplement 411 может помочь спортсменам принимать обоснованные решения, чтобы осознавать, распознавать и снижать риски, связанные с приемом пищевых добавок.

Ресурсы:
Национальный центр биотехнологической информации. База данных PubChem Compound; CID = 25249, http://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/25249 (по состоянию на 27 апреля 2015 г.).

Гейер Х., Парр М.К., Келер К., Марек У., Шанцер У., Тевис М. Пищевые добавки перекрестно загрязнены и подделаны допинговыми веществами. J. Mass Spectrom. 2008 июл; 43 (7): 892-902.

Управление по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов. Лекарства @ FDA: Станозолол http://www.accessdata.fda.gov/scripts/cder/drugsatfda/index.cfm?fuseaction=Search.DrugDetails

Уведомление Управления по санитарному надзору за качеством пищевых продуктов и медикаментов в Федеральном реестре США. 21 июля 2010 г. https://www.federalregister.gov/articles/2010/07/21/2010-17785/novartis-pharmaceuticals-corp-et-al-withdrawal-of-approval-of-27-new-drug -приложения-и-58

Постановление Палаты представителей 4771 (113 th ): Закон о контроле над анаболическими стероидами от 2014 года. https://www.govtrack.us/congress/bills/113/hr4771

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Тугба Котиль

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

Полихронис Д. Стивактакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: [email protected]Профессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества - это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3'-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола.

Ключевые слова: станозолол, фосфатаза и гомолог тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3'-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто злоупотребляемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3'-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза - это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры - это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3'-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3'-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

272 9023 9023 268 2724 9022 9023 264
Количество крыс Вес крыс на момент покупки (г)
Контроль
1 259
2 9023 9023
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2 9023 9023 261
5 272
Пропиленгликоль и эликсир
1 262
2 276 276
5 278
6 263 902 39
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 265 4 272
5 277
6 272
7 263
8 290 9022 8 290 9023 275
2 277
3 290
4 263
5 280 280 280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Кол-во крыс Подкожные инъекции Упражнения
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 1 8 8 8 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнения (26,27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo и (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

Через 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ

Стандарты станозолола, 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3'-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 38623.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (qPCR) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5'-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 'и обратный, 5'-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3'; TERT вперед, 5'-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 '; и наоборот, 5'-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 '; и GAPDH прямой, 5'-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 'и обратный, 5'-CTCAGCACCAGCATCACC-3'.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен IHC-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченого стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана использовались для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены как относительные изменения в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3'-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3'-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

0,44
Агент Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение
Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3'-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная процентная активность теломеразы в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

9023 9023
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt ) 9023 9023 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 40 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол лечение и упражнения 1,13
Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис
Обработка пропиленгликолем 578 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
0,81 0,96
Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97
% относительной активности теломеразы 30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом 9023 9023 P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между процентной относительной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3'-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3'-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и физические упражнения + +
Станозолол лечение и упражнения ++ 3 ++ ++ Обсуждение

Станозолол - широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисленных оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в ткани печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3'-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3'-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа плавательных упражнений подавляет маркеры старения и снижает регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Аббревиатуры

-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3'-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3'-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 посредством NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О'Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Тестостерон-рецептор-положительный гепатоцеллюлярная карцинома у 29-летнего культуриста с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Pilati C, Letouzé E, Nault JC, Imbeaud S, Boulai A, Calderaro J, Poussin K, Franconi A, Couchy G, Morcrette G и др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Annu Rev Nutr. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3'-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О'Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC компонент теломеразы 9022 компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении
химическая ионизация при атмосферном давлении
Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов 2017 года. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р., Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97)
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.С., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Тугба Котиль

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

Полихронис Д. Стивактакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: [email protected]Профессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества - это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3'-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола.

Ключевые слова: станозолол, фосфатаза и гомолог тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3'-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто злоупотребляемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3'-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза - это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры - это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3'-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3'-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

272 9023 9023 268 2724 9022 9023 264
Количество крыс Вес крыс на момент покупки (г)
Контроль
1 259
2 9023 9023
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2 9023 9023 261
5 272
Пропиленгликоль и эликсир
1 262
2 276 276
5 278
6 263 902 39
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 265 4 272
5 277
6 272
7 263
8 290 9022 8 290 9023 275
2 277
3 290
4 263
5 280 280 280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Кол-во крыс Подкожные инъекции Упражнения
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 1 8 8 8 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнения (26,27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo и (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

Через 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ

Стандарты станозолола, 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3'-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 38623.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (qPCR) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5'-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 'и обратный, 5'-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3'; TERT вперед, 5'-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 '; и наоборот, 5'-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 '; и GAPDH прямой, 5'-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 'и обратный, 5'-CTCAGCACCAGCATCACC-3'.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен IHC-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченого стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана использовались для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены как относительные изменения в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3'-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3'-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

0,44
Агент Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение
Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3'-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная процентная активность теломеразы в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

9023 9023
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt ) 9023 9023 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 40 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол лечение и упражнения 1,13
Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис
Обработка пропиленгликолем 578 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
0,81 0,96
Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97
% относительной активности теломеразы 30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом 9023 9023 P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между процентной относительной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3'-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3'-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и физические упражнения + +
Станозолол лечение и упражнения ++ 3 ++ ++ Обсуждение

Станозолол - широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисленных оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в ткани печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3'-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3'-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа плавательных упражнений подавляет маркеры старения и снижает регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Аббревиатуры

-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3'-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3'-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 посредством NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О'Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Тестостерон-рецептор-положительный гепатоцеллюлярная карцинома у 29-летнего культуриста с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Pilati C, Letouzé E, Nault JC, Imbeaud S, Boulai A, Calderaro J, Poussin K, Franconi A, Couchy G, Morcrette G и др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Annu Rev Nutr. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3'-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О'Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC компонент теломеразы 9022 компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении
химическая ионизация при атмосферном давлении
Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов 2017 года. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р., Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97)
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.С., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Тугба Котиль

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

Полихронис Д. Стивактакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: [email protected]Профессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества - это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3'-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола.

Ключевые слова: станозолол, фосфатаза и гомолог тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3'-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто злоупотребляемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3'-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза - это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры - это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3'-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3'-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

272 9023 9023 268 2724 9022 9023 264
Количество крыс Вес крыс на момент покупки (г)
Контроль
1 259
2 9023 9023
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2 9023 9023 261
5 272
Пропиленгликоль и эликсир
1 262
2 276 276
5 278
6 263 902 39
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 265 4 272
5 277
6 272
7 263
8 290 9022 8 290 9023 275
2 277
3 290
4 263
5 280 280 280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Кол-во крыс Подкожные инъекции Упражнения
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 1 8 8 8 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнения (26,27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo и (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

Через 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ

Стандарты станозолола, 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3'-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 38623.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (qPCR) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5'-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 'и обратный, 5'-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3'; TERT вперед, 5'-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 '; и наоборот, 5'-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 '; и GAPDH прямой, 5'-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 'и обратный, 5'-CTCAGCACCAGCATCACC-3'.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен IHC-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченого стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана использовались для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены как относительные изменения в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3'-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3'-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

0,44
Агент Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение
Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3'-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная процентная активность теломеразы в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

9023 9023
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt ) 9023 9023 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 40 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол лечение и упражнения 1,13
Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис
Обработка пропиленгликолем 578 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
0,81 0,96
Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97
% относительной активности теломеразы 30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом 9023 9023 P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между процентной относительной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3'-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3'-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и физические упражнения + +
Станозолол лечение и упражнения ++ 3 ++ ++ Обсуждение

Станозолол - широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисленных оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в ткани печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3'-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3'-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа плавательных упражнений подавляет маркеры старения и снижает регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Аббревиатуры

-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3'-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3'-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 посредством NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О'Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Тестостерон-рецептор-положительный гепатоцеллюлярная карцинома у 29-летнего культуриста с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Pilati C, Letouzé E, Nault JC, Imbeaud S, Boulai A, Calderaro J, Poussin K, Franconi A, Couchy G, Morcrette G и др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Annu Rev Nutr. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3'-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О'Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC компонент теломеразы 9022 компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении
химическая ионизация при атмосферном давлении
Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов 2017 года. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р., Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97)
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.С., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Прием станозолола в сочетании с упражнениями приводит к снижению активности теломеразы, возможно, связанному со старением печени

Int J Mol Med. 2018 июл; 42 (1): 405–413.

, # 1, * , # 1, * , 2 , 3 , 3 , 4 , 3 , 3 , 5 , 3 и 1

Эрен Озкагли

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Мехтап Кара

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета

Тугба Котиль

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

Персефони Фрагкиадаки

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Манолис Н.Цацаракис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Кристина Цицимпику

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

Полихронис Д. Стивактакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, 71003 Ираклион

Димитриос Цукалас

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

Деметриос А.Спандидос

5 Лаборатория клинической вирусологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион, Греция

Аристидес М. Цацакис

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии Медицинского факультета Критского университета, 71003 Ираклион

Букет Альпертунга

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

1 Кафедра фармацевтической токсикологии фармацевтического факультета и

2 Кафедра гистологии и эмбриологии медицинского факультета Стамбульского университета, Стамбул 34116, Турция

3 Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион

4 Общая химическая государственная лаборатория Греции, 11521 Афины

5 Лаборатория клинической вирусологии, Медицинский факультет, Университет Крита, 71003 Ираклион, Греция

# Внесен равный вклад.

Для корреспонденции: профессору Букету Альпертунга, кафедра фармацевтической токсикологии, фармацевтический факультет, Стамбульский университет, Беязит, Стамбул 34116, Турция, электронная почта: [email protected]Профессору Аристидесу М. Цацакису, Лаборатория судебной медицины и токсикологии, Медицинская школа, Университет Крита, ПО Box 1393, 71003 Heraklion, Greece, E-mail: [email protected]

* Внесено поровну

Получено 28 февраля 2018 г .; Принято 11 апреля 2018 г.

Эта статья цитировалась в других статьях в PMC.
Заявление о доступности данных

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Реферат

Анаболические вещества - это допинговые вещества, которые обычно используются в спорте. Станозолол, 17α-алкилированное производное тестостерона, широко используется спортсменами и бодибилдерами. Некоторые медицинские и поведенческие побочные эффекты связаны со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами (ААС), в то время как печень остается наиболее узнаваемым органом-мишенью.В настоящем исследовании изучалось влияние на печень введения станозолола крысам в высоких дозах, напоминающих дозы, применяемые для допинга, в присутствии или отсутствии физических упражнений. Станозолол и его метаболиты, 16-β-гидроксистанозолол и 3'-гидроксистанозолол, были обнаружены в печени крыс с помощью жидкостной хроматографии-масс-спектрометрии (ЖХ-МС). Активность теломеразы, которая участвует в клеточном старении и онкогенезе, была обнаружена путем исследования уровней экспрессии обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и фосфатазы и гомолога тензина (PTEN) в печени крыс, получавших станозолол.Станозолол индуцировал теломеразную активность на молекулярном уровне в ткани печени крыс, и упражнения обращали эту индукцию, отражая возможное преждевременное старение ткани печени. На экспрессию гена PTEN в печени крыс практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола.

Ключевые слова: станозолол, фосфатаза и гомолог тензина, теломеразная обратная транскриптаза, теломеразная активность, 16-β-гидроксистанозолол, 3'-гидроксистанозолол

Введение

Станозолол является анаболическим андрогенным стероидом, повышающим эффективность.Среди всех ААС станозолол является одним из наиболее часто используемых стероидов профессиональными спортсменами и молодыми людьми для улучшения внешнего вида и работоспособности. Станозолол представляет собой 17α-алкилированное производное тестостерона с анаболическими и высокими андрогенными свойствами (1,2), и его использование в спорте запрещено Всемирным антидопинговым агентством (WADA) (3).

В прошлом ААС использовались только элитными спортсменами и бодибилдерами для целей допинга. Однако в настоящее время даже молодые люди злоупотребляют ААС в супрафизиологических дозах для улучшения внешнего вида (4,5).Сообщается, что станозолол является одним из наиболее часто злоупотребляемых ААС (6), и он отвечает за несколько медицинских и поведенческих побочных эффектов, являясь признанным фактором риска заболеваний печени как у экспериментальных животных, так и у людей (7-13). . Станозолол широко биотрансформируется ферментативными путями в печени. Сообщалось, что основными метаболитами станозолола являются 3'-гидроксистанозолол, 4-β-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол (14,15). В общем, ААС проявляют свои эффекты посредством нескольких различных механизмов, таких как модуляция экспрессии рецепторов андрогенов (16).Неблагоприятные эффекты, связанные с печенью, чаще связаны с 17α-алкильными производными ААС и, как сообщается, не связаны с путем введения. Однако точные механизмы еще полностью не изучены (17).

Теломеры представляют собой гетерохроматиновые нуклеопротеидные комплексы на концах хромосом, участвующие в ряде основных биологических функций (). Известно, что теломеры играют ключевую роль в формировании и прогрессировании до 90% злокачественных новообразований. Теломеразная активность играет ключевую роль в клеточном старении и онкогенезе (18).Повышенная активность теломеразы обнаруживается в большинстве случаев рака человека (19). Теломераза - это рибонуклеопротеин, отвечающий за поддержание длины теломер. Ядро теломеразы состоит из двух компонентов: каталитической обратной транскриптазы теломеразы (TERT) и компонента теломеразной РНК (TERC) ().

Теломеры - это защитные колпачки хромосом (59) (адаптировано с разрешения Shutterstock).

Теломераза добавляет теломерные повторы (TTAGGG) к 3'-гидроксильному концу ведущей цепи теломеры.Компонент РНК служит шаблоном для добавления нуклеотидов. Это теломеразный комплекс, который состоит из компонента обратной транскриптазы (TERT), компонента РНК (TERC), белка дискерина и других связанных белков (NHP2, NOP10 и GAR1).

Уровень экспрессии мРНК TERT был изучен как биомаркер, поскольку было продемонстрировано, что он является лимитирующим детерминантом активности теломеразы при различных злокачественных новообразованиях (20). Ген фосфатазы и белка гомолога тензина (PTEN) кодирует белок-супрессор опухоли с фосфатазной активностью.Сообщается, что частота гетерозиготности PTEN при гепатоцеллюлярной карциноме человека (ГЦК) человека снижается до 33% (21). PTEN участвует в подавлении активности теломеразы посредством регуляции активности TERT (22). PTEN является негативным регуляторным белком сигнального пути фосфоинозитид-3-киназы / AKT механизма регуляции выживания клеток и индуцирует клеточный апоптоз (23). PTEN предотвращает активацию AKT посредством дефосфорилирования фосфатидилинозитол (3,4,5) -трисфосфата (PIP3) до фосфатидилинозитол-4,5-бисфосфата (PIP2).Подавление PTEN связано с онкогенной активностью в клетке (24).

Целью этого исследования было изучить, по крайней мере, насколько нам известно, роль теломеразы в вызванной станозололом гепатотоксичности путем изучения корреляции между активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена PTEN-TERT. Также исследовали биоаккумуляцию станозолола и двух его основных метаболитов (3'-гидроксистанозолол и 16-β-гидроксистанозолол) в ткани печени, а также его связь с активностью теломеразы.

Материалы и методы

Эксперименты на животных

Всего было получено 34 крысы-самца Sprague-Dawley в возрасте 8 недель и размещено в помещениях для лабораторных животных Департамента лабораторных наук о животных Института экспериментальной медицины Стамбульского университета. (Стамбул, Турция) в соответствии с Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер утверждения 2013/100). Крысы были разделены на 5 групп следующим образом: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).Животных размещали по 4 животных в одной металлической клетке и содержали в 12-часовом цикле темнота / свет при температуре 20–23 ° C. Количество крыс в экспериментальной группе, уход за крысами, обращение и используемые экспериментальные процедуры соответствовали руководящим принципам HADYEK. Вес крыс при покупке регистрировали и использовали для корректировки дозы (). Гуманными конечными точками, определенными в нашем исследовании, были боль, дистресс, неправильная осанка и судороги в соответствии с Руководящим документом ОЭСР (25). Ни у одного животного не было клинических признаков гуманных конечных точек, которые оправдывали бы их жертвоприношение до окончания эксперимента.Экспериментальный план исследования представлен в.

Таблица I

Вес крыс при покупке.

272 9023 9023 268 2724 9022 9023 264
Количество крыс Вес крыс на момент покупки (г)
Контроль
1 259
2 9023 9023
4 264
5 282
Пропиленгликоль
1 255
2 9023 9023 261
5 272
Пропиленгликоль и эликсир
1 262
2 276 276
5 278
6 263 902 39
7 260
8 277
Стероидная группа
1 280
2 265 4 272
5 277
6 272
7 263
8 290 9022 8 290 9023 275
2 277
3 290
4 263
5 280 280 280
8 273

Таблица II

Experi мысленный дизайн исследования.

мл / кг пропиленгликоля в день
Группы Кол-во крыс Подкожные инъекции Упражнения
Контроль 5 Без инъекций Без упражнений
Без упражнений
Лечение станозололом 8 5 мг / кг станозолола в день Без упражнений
Лечение пропиленгликолем и упражнения 1 8 8 8 кг пропиленгликоля в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней в неделю
Лечение станозололом и упражнения 8 5 мг / кг станозолола в день Плавание: 20 мин / день, 5 дней / неделя

Плавание было выбрано в качестве модели упражнения (26,27) и началось за 1 неделю до схемы лечения, чтобы мальчики адаптироваться.Крыс плавали в прямоугольном полиэтиленовом резервуаре (длина 120 см × глубина 50 см × ширина 43 см), наполненном водой при температуре 29 ± 1 ° C. Во время экспериментов в течение 20 минут в день, 5 дней в неделю крыс подвергали плаванию после периода адаптации в течение 1 недели. Животных адаптировали к процессу плаванием в воде в течение 5 минут в течение первых 2 дней, а затем время плавания постепенно увеличивали до 5 минут в день до конечной продолжительности 20 минут на 5 день.

Пропиленгликоль (PG ) (Tekkim, Стамбул, Турция) использовался в качестве носителя для станозолола (Sigma, Schnelldorf, Германия).Известно, что PG является хорошим проводником для экспериментальных исследований in vivo и (28,29). Однако сообщалось, что высокие концентрации PG могут вызывать повреждение ДНК в эукариотических клетках и ооцитах мышей (30,31). Подкожное введение было выбрано, а дозы были выбраны в соответствии с предыдущими исследованиями (32–34). Группы, подвергшиеся воздействию, получали однократную дозу PG (1 мл / кг) и ST (5 мл / кг) подкожно в течение 5 дней в неделю.

Через 28 дней лечения животным была проведена легкая анестезия с использованием процента 1.9% диэтиловый эфир в анестезиологической камере и эвтаназия путем шейного вывиха, проводимая обученным персоналом. Были собраны образцы ткани печени и разделены на 2 секции. Один срез немедленно замораживали в жидком азоте и хранили при -80 ° C, а другой фиксировали 10% забуференным формалином и залитым парафином для гистохимического анализа.

Жидкостная хроматография-масс-спектрометрия (ЖХ-МС) анализ

Стандарты станозолола, 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола в концентрациях 0,0.1, 0,25, 0,5 и 1 частей на миллион были приготовлены из стандартных исходных растворов с концентрацией 20 частей на миллион. Туринабол (LGC, Лидс, Великобритания) использовали в качестве внутреннего стандарта (IS) с целевыми ионами m / z 317,25 и m / z 335,25. Калибровочные кривые были получены путем измерения отношения площадей пиков целевых ионов к IS следующим образом: для станозолола m / z 370,4 , 352,3 и 329,35, для 3'-гидроксистанозолола m / z 386,4 , 345,35, для 16-β- гидроксистанозолол m / z 386,4 , 366,3 и 345,35 для IS туринабол () (ион m / z, используемый для количественной оценки, выделен жирным шрифтом).Образцы печени необработанных животных, которые дали отрицательные результаты (

Таблица III

Параметры анализа ЖХ-МС.

Агент Rt m / z target m / z m / z Mw
4α-гидроксистанозолол 9 38623.4 345,35
4β-hydroxystanozolol 9,3 386,4 345,35
3-hydroxystanozolol 10,15 386,4 345,35 344,49
16-β-гидроксистанозолол 10,45 386,4 366,3 345,35 344,49
Станозолол 12.95 370,4 352,3 329,35 328,49
Туринабол (IS) 13,9 317,25 335,25 334 механическая гомогенизация на высокой скорости в течение 2 мин с 1,0 мл воды. Гомогенаты сильно встряхивали и затем инкубировали в ультразвуковой бане в течение 10 мин. Затем добавляли 1,5 мл этилацетата и проводили экстракцию аналитов в течение 10 мин.Образцы центрифугировали при 1820 × g в течение 2 мин при 4 ° C. Супернатанты переносили в пустую пробирку и упаривали досуха в атмосфере азота при 30 ° C. После выпаривания добавляли 100 мкл л ацетонитрила и сильно встряхивали. Супернатанты переносили во флаконы, и 10 мкл мкл из них вводили в систему ЖХ-МС для анализа.

Система ЖХ-МС состоит из бинарного насоса ЖХ (Shimadzu Prominence, Киото, Япония), вакуумного дегазатора, автоматического пробоотборника и термостата для колонок.В качестве подвижной фазы был выбран градиент 0,1% муравьиной кислоты в воде (растворитель A) и ацетонитриле (растворитель B). Разделение аналитов было достигнуто на колонке для ВЭЖХ Discovery C18 (250 × 4,6 мм, 5 мкм, м), термостатированной при 30 ° C. Масс-спектрометр (LCMS-2010 EV; Shimadzu Prominence) в сочетании с интерфейсом химической ионизации при атмосферном давлении (APCI) и одиночным квадрупольным масс-фильтром использовался в выбранном положительном режиме ионного мониторинга (SIM). Температура интерфейса, CDL и теплового блока составляла 400, 200 и 200 ° C соответственно.Напряжение детектора составляло 1,5 кВ, поток распыляющего газа составлял 2,5 л / мин, а осушающий газ составлял 0,02 МПа.

Анализ активности теломеразы

Определение активности теломеразы в образцах ткани печени крысы выполняли количественно с использованием набора teloTAGGG telomerase PCR ELISA PLUS (Roche Diagnostic GmbH, Mannheim, Germany). Протокол набора следовал для оценки активности теломеразы, как описано ранее (35,36).

Оценка экспрессии гена

Выделение

РНК проводили из залитых парафином срезов ткани печени крысы с использованием выделения РНК High Pure FFPET (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя.Для синтеза кДНК использовали фиксированное количество РНК из каждого образца. кДНК получали с использованием набора Transcriptor First Strand cDNA Synthesis (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Уровни экспрессии генов TERT и PTEN анализировали с помощью количественной (в реальном времени) полимеразной цепной реакции (qPCR) с использованием аппарата Light Cycler 480 (Roche Diagnostic GmbH) с анализом каталога Real Time Ready (Roche Diagnostic GmbH) в соответствии с инструкциями производителя. Последовательности праймеров были следующими: PTEN прямой, 5'-AGAACAAGATGCTCAAAAAGGACAA-3 'и обратный, 5'-TGTCAGGGTGAGCACAAGAT-3'; TERT вперед, 5'-GACATGGAGAACAAGCTGTTTGC-3 '; и наоборот, 5'-ACAGGGAAGTTCACCACTGTC-3 '; и GAPDH прямой, 5'-TTCAACGGCACAGTCAAGG-3 'и обратный, 5'-CTCAGCACCAGCATCACC-3'.ПЦР-амплификации выполняли в соответствии с инструкциями производителя в трех экземплярах. Реакционную смесь без матрицы кДНК использовали в качестве отрицательного контроля. Уровни экспрессии (2 -ΔΔCt ) рассчитывали, как описано ранее (37,38).

Иммуногистохимический (ИГХ) анализ

ИГХ-анализы были выполнены с использованием наборов для определения ультра стрептавидина HRP [BioLegend Sig-32248, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-Specation, DAB)] и BioLegend Sig-32250, набор для определения ультра стрептавидина HRP (Multi-views, AEC) (BioLegend, San Diego, CA, USA) для уровней экспрессии PTEN и TERT соответственно.Залитые парафином срезы помещали на предметные стекла Superfrost (Menzel-Gläser, Брауншвейг, Германия). После сушки в течение ночи был проведен IHC-анализ PTEN и TERT с использованием метода меченого стрептавидин-биотин-пероксидазы. Предметные стекла обрабатывали ксилолом и регидратировали в растворах этанола возрастающих классов. Извлечение антигена осуществляли путем кипячения предметных стекол в течение 5 мин / 3 раза в цитратном буфере (0,01 М). Для подавления активности эндогенной пероксидазы срезы ткани обрабатывали блокирующим реагентом 1 в течение 15 минут и промывали PBS.Все срезы инкубировали с блокирующим реагентом 2 в течение 5 минут при комнатной температуре, чтобы избежать неспецифического связывания. Инкубации поликлональных антител PTEN (251264) и TERT (250509) (оба от Abbiotec, Aachen, Germany) проводили в течение ночи при 4 ° C с разведениями 1/100. Слайды инкубировали со связывающим реагентом 4, а затем с реагентом для маркировки 5 в течение 20 минут при комнатной температуре. Слайды визуализировали хромогенами DAB и AEC, контрастировали гематоксилином Майера и, наконец, монтировали.Уровни экспрессии PTEN и TERT оценивали под световым микроскопом (Olympus BX40F4; Olympus, Токио, Япония). Анализы TERT и PTEN IHC были классифицированы невооруженным глазом на 4 категории на основе интенсивности окрашивания следующим образом: 0, нет окрашивания; +, слабое окрашивание; ++, умеренное окрашивание; и +++, сильное окрашивание). Анализ проводился с использованием считывающего устройства для одного слайда для минимизации вариабельности из-за субъективной оценки.

Статистический анализ

Средние значения ± стандартное отклонение и медиана использовались для экспрессии уровней станозолола и его метаболитов, а также для PTEN, TERT и относительной теломеразной активности в процентах.Изменения между двумя значениями были выражены как относительные изменения в процентах или иным образом на основе следующей формулы: (фактическое изменение / контрольное значение) * 100%.

Тест Колмогорова-Смирнова с поправкой Лилиэфорса применялся для проверки нормальности непрерывных переменных. R Спирмена применяли для измерения двумерных корреляций между двумя непрерывными переменными (например, относительная активность теломеразы в процентах по сравнению с уровнями экспрессии гена 3'-гидроксистанозолола TERT). Непараметрический тест Краскела-Уоллиса и параметрический односторонний дисперсионный анализ ANOVA применялись для сравнения различий в уровнях станозолола и его метаболитов между исследуемыми группами (контрольная, станозолол, PG и группы упражнений).Непараметрические апостериорные сравнения оценивали с использованием тестов Данна (непараметрические) и HSD Тьюки для параметрических тестов. Для статистического анализа использовалось программное обеспечение IBM SPSS Statistics 21.0 (IBM Corp., Армонк, Нью-Йорк, США). Уровень 0,05 был установлен для принятия или отклонения нулевой гипотезы (статистическая значимость). Размеры выборок для отдельных анализов незначительно различались из-за того, что некоторые недостающие значения возникли из-за условий эксперимента.

Результаты

Тесты на нормальность

Тесты на нормальность показали, что только процентная относительная активность теломеразы сохранила нулевую гипотезу, предполагая нормальное распределение данных (P = 0.137). Все другие протестированные непрерывные переменные, такие как TERT, PTEN и 3'-гидроксистанозолол, не следовали нормальному распределению (P <0,01) (данные не показаны).

Биоаккумуляция станозолола и его метаболитов в тканях печени

Результаты обобщены в. Уровни станозолола и его метаболитов были незначительно выше в группе STE по сравнению с группой ST (P> 0,05).

Таблица IV

Уровни концентрации (нг / мг) станозолола и его метаболитов в группах станозолола (ST) и станозолола в сочетании с упражнениями (STE).

0,44
Агент Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Группа ST (среднее значение ± стандартное отклонение) Манна-Уитни (значение P) % относительное изменение
Станозолол (нг / мг ) 2,98 ± 1,01 3,89 ± 1,09 0,240 30,5
3'-гидроксистанозолол (нг / мг) 0,34 ± 0,06 0,44 ± 0,18 16-β-гидроксистанозолол (нг / мг) 0.25 ± 0,11 0,32 ± 0,15 0,485 28,0

Оценка теломеразной активности и экспрессии генов

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT и относительная процентная активность теломеразы в исследуемых группах представлены в. Значительная разница наблюдалась для экспрессии гена TERT в различных группах (χ 2 = 17,585, df = 4, P <0,001). Основываясь на тесте Данна, упражнения снижали экспрессию TERT на (71,0%; P = 0,001), а введение ST увеличивало экспрессию TERT на (160%; P <0.001) по сравнению с группой PG. Следует отметить, что вызванное станозололом увеличение экспрессии TERT по сравнению с группой станозолола было ограничено (68,0%; P = 0,042) у животных, подвергшихся физической нагрузке. Аналогичная картина наблюдалась и для процентной активности теломеразы. На экспрессию гена PTEN практически не влияли ни упражнения, ни прием станозолола. Следует отметить, что не все значения, представленные выше, показаны в из-за большого количества попарных сравнений.

Таблица V

Уровни экспрессии генов PTEN и TERT (2 -ΔΔCt ) и% относительной активности теломеразы на группу.

9023 9023
Параметры Группы N Среднее SD Сравнение групп
Экспрессия гена PTEN (2 −ΔΔCt ) 9023 9023 Kruskal-Wallis
Обработка пропиленгликолем 5 0,37 0,25 χ 2 = 3,643,
Обработка станозололом 40 0,42 df = 4, P = 0,456
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,98 1,62
Станозолол лечение и упражнения 1,13
Экспрессия гена TERT (2 -ΔΔCt ) Контроль 5 0,40 0,41 Краскал-Уоллис
Обработка пропиленгликолем 578 2,66 χ 2 = 17,585,
Лечение станозололом 6 7,25 1,40 df = 4, P = 0,001
0,81 0,96
Лечение станозололом и упражнения 6 2,29 0,97
% относительной активности теломеразы 30 0,58 ANOVA:
Обработка пропиленгликолем 5 1,92 0,96 F = 3,015, df = 4,
Обработка станозололом 9023 9023 P = 0,040
Лечение пропиленгликолем и упражнения 5 0,76 0,61
Лечение станозололом и упражнения 6 1.33 0,96

Умеренная корреляция между процентной относительной активностью теломеразы и уровнями экспрессии гена TERT наблюдалась с использованием коэффициента корреляции Спирмена (r = 0,424, P = 0,028) (). Уровни 3'-гидроксистанозолола, измеренные в группах ST и STE, имели тенденцию отрицательно коррелировать с относительной процентной активностью теломеразы (r Спирмена r = -0,566, P = 0,055) (). Не наблюдалось корреляции между какими-либо параметрами, отслеживаемыми с помощью станозолола и 16-β-гидроксистанозолола (данные не показаны).

Диаграмма разброса экспрессии гена TERT и относительной активности теломеразы в процентах. TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Диаграмма рассеяния 3'-гидроксистанозолола и относительная активность теломеразы в процентах.

Анализы ИГХ

Изображения окрашивания ИГХ показаны в, а результаты суммированы в. Уровни экспрессии гена PTEN наблюдались вокруг центральной вены и паренхимы. В группе STE окрашивание гепатоцитов, окружающих эти области, было умеренным.Анализ TERT IHC выявил сильное окрашивание в группе ST вокруг портального поля, центральной вены и паренхимы, в то время как упражнения ослабляли увеличение экспрессии гена TERT (умеренное окрашивание в группе STE). Таким образом, наши результаты показали, что упражнения оказывают положительное влияние на экспрессию гена PTEN, как показано на рис.

Иммуногистохимическое окрашивание белков PTEN и TERT во всех экспериментальных группах (шкала, 50 мкм мкм). Группы крыс были следующими: i) контрольная (C) группа; ii) группу обработки пропилена (PG); iii) группу обработки станозололом (ST); iv) группа лечения и упражнений с пропиленом (PGE); и v) группа лечения станозололом и физических упражнений (STE).PTEN, белок-гомолог фосфатазы и тензина, TERT, обратная транскриптаза теломеразы.

Таблица VI

Результаты подсчета для иммуногистохимических анализов PTEN и TERT.

Группы Оценка PTEN IHC a Оценка TERT IHC a
Control + +
Лечение станозололом + +++
Лечение пропиленгликолем и физические упражнения + +
Станозолол лечение и упражнения ++ 3 ++ ++ Обсуждение

Станозолол - широко используемый и наиболее мощный ААС, ответственный за ряд побочных эффектов, включая сердечно-сосудистые, репродуктивные, поведенческие эффекты и гепатотоксичность (17).Насколько нам известно, это первое исследование, посвященное изучению вызванных станозололом молекулярных путей активности теломеразы в печени крыс и любых соответствующих эффектов физических упражнений. Станозолол вызывает внутрипеченочные структурные изменения с холестазом и увеличивает риск ГЦК (37). Кроме того, было обнаружено, что злоупотребление ААС в целом является причиной гепатоцеллюлярных аденом (12,39). Несмотря на то, что механизмы, ответственные за вызванную станозололом гепатотоксичность, еще четко не идентифицированы, пролиферативные эффекты на клетки печени могут играть центральную роль в наблюдаемой гепатотоксичности (12,40,41).В нашем предыдущем исследовании мы продемонстрировали, что станозолол оказывает повреждающее действие на ДНК в лимфоцитах периферической крови, что, вероятно, связано с изменениями активности теломеразы (35). Хотя известно, что различные факторы окружающей среды повышают и понижают активность теломеразы, влияние физических упражнений на активность теломеразы еще не было четко идентифицировано (42). Было показано, что на длину теломер и активность теломеразы влияет несколько факторов, включая оксидативный стресс, психологический стресс и социально-экономический статус.Одним из возможных механизмов укорочения теломер является окислительный стресс из-за продуктов окисленных оснований ДНК (8-OHdG) в гуаниновых или белковых аддуктах (43,44). Согласно недавним исследованиям, повышенная активность теломеразы обнаруживается почти в 90% случаев рака человека и в 80% случаев ГЦК. Кроме того, хорошо задокументировано, что большинство здоровых клеток не проявляют активности теломеразы (19,20,45). Результаты этого исследования продемонстрировали повышенные уровни относительной активности теломеразы в ткани печени в группе ST, в соответствии с нандролоном, другим хорошо известным ASS, который продемонстрировал аналогичные эффекты за счет увеличения активности теломеразы в зависимости от дозы как ткань сердца и моноциты периферической крови (2,46).Это может представлять собой компенсирующий механизм восстановления на тканевом уровне, в то время как повышенные уровни циркулирующей активности теломеразы могут указывать на системное воспаление. Связь повышенной активности и экспрессии теломеразы с пролиферативными эффектами в этом исследовании вряд ли возникла из-за короткого времени воздействия (28 дней). В целом механизмы, лежащие в основе влияния ААС на активность теломеразы, не выяснены и остаются практически неизвестными.

TERT представляет собой каталитическую субъединицу теломеразы, которая играет роль в ее регуляции на уровне транскрипции.Сообщалось, что мутации TERT связаны с переходом от аденомы к карциноме в печени (47). Следовательно, изменения в регуляции и экспрессии TERT играют важную роль при ГЦК (48). Было показано, что ген-супрессор опухолей PTEN отрицательно коррелирует с белком TERT человека в тканях HCC (21). Следовательно, PTEN и TERT играют противоположные роли в канцерогенезе. Сообщалось, что PTEN косвенно регулирует активность TERT через путь PI3K-PKB / Akt при ГЦК человека (21).Согласно результатам настоящего исследования, не наблюдалось значительных изменений в уровнях экспрессии PTEN между группами. Однако экспрессия гена TERT была значительно увеличена при лечении ST. Упражнения обращали вспять увеличение экспрессии TERT, вызванное станозололом, особенно в паренхиме, где сообщается о метаболической зональности: высвобождение глюкозы из гликогена и посредством глюконеогенеза, утилизация аминокислот и детоксикация аммиака, защитный метаболизм, образование желчи и синтез определенных белков плазмы, такие как альбумин и фибриноген, происходят в основном в перивенальной зоне, тогда как утилизация глюкозы, метаболизм ксенобиотиков и образование других белков плазмы, таких как альфа-1-антитрипсин или альфа-фетопротеин, происходят преимущественно в перивенальной зоне (49,50).

В этом исследовании уровни 3'-гидроксистанозолола и 16-β-гидроксистанозолола, основных метаболитов станозолола, были определены в образцах ткани печени животных, получавших станозолол, и были определены доза-ответная связь между активностью теломеразы и TERT / PTEN. экспрессия генов была определена. Измеренные уровни 3'-гидроксистанозолола в группах ST и STE были связаны с процентной относительной теломеразной активностью, тогда как для уровней станозолола или 16-β-гидроксистанозолола никакой связи не наблюдалось.Это может быть связано с тем, что 3'-гидроксистанозолол является наиболее мощным метаболитом станозолола (2,51).

Несколько исследований показали, что физические упражнения увеличивают активность теломеразы в различных типах клеток (52,53). Однако, насколько нам известно, на сегодняшний день нет доступных исследований, изучающих влияние станозолола на активность теломеразы в присутствии / отсутствии упражнений, за исключением нашего предыдущего исследования, которое было сосредоточено на циркуляции активности теломеразы в мононуклеарных клетках периферической крови (PBMCs). ) (35).Наши результаты показали повышение активности теломеразы и экспрессии TERT в ткани печени, что может быть связано либо с повышенным риском пролиферации из-за лечения станозололом (10), что маловероятно для такого короткого периода воздействия, либо может представлять собой механизм противодействия ( 54). Упражнения обращают вспять вызванное станозололом повышение активности теломеразы. Ряд исследований подтвердил, что упражнения обладают гепатопротекторным действием. Huang и др. продемонстрировали, что 12-недельная программа плавательных упражнений подавляет маркеры старения и снижает регуляцию воспалительных медиаторов в тканях печени у крыс, вызванных D-галактозой (55).Yi и др. продемонстрировали, что как острые, так и хронические упражнения оказывают профилактическое действие на печень крыс с диабетом 2 типа (56). С другой стороны, сообщалось, что физические упражнения увеличивают количество печеночных ферментов у людей (57), и существуют опасения относительно влияния физических упражнений на портальную гипертензию у пациентов с циррозом печени (58).

В заключение, станозолол индуцирует активность теломеразы на молекулярном уровне, и упражнения обращают эту индукцию, по крайней мере, в отношении экспрессии TERT.Это может отражать преждевременное старение тканей из-за снижения активности теломеразы. Необходимы дальнейшие исследования для изучения механизмов, с помощью которых упражнения могут быть использованы для предотвращения неблагоприятного воздействия станазолола на здоровье, и для выяснения молекулярных гепатоцеллюлярных механизмов побочных эффектов, вызванных станозололом.

Благодарности

Авторы хотели бы поблагодарить доктора Алегакиса Афанасиоса за его ценную помощь в статистических советах и ​​комментариях.

Аббревиатуры

-5. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 9.Эль-Сераг HB, Крамер Дж., Дуан З., Канвал Ф. Расовые различия в прогрессировании цирроза и гепатоцеллюлярной карциномы у ветеранов, инфицированных ВГС. Am J Gastroenterol. 2014; 109: 1427–1435. DOI: 10.1038 / ajg.2014.214. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 10. Hansma P, Diaz FJ, Njiwaji C. Смертельный разрыв кисты печени из-за использования анаболических стероидов: презентация случая. Am J Forensic Med Pathol. 2016; 37: 21–22. DOI: 10.1097 / PAF.0000000000000218. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 11. Харкин К.Р., Коуэн Л.А., Эндрюс Г.А., Басараба Р.Дж., Фишер Дж.Р., Дебоуз Л.Дж., Руш Дж.К., Гульельмино М.Л., Кирк, Калифорния.Гепатотоксичность станозолола у кошек. J Am Vet Med Assoc. 2000. 217: 681–684. DOI: 10.2460 / javma.2000.217.681. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 12. Сокас Л., Зумбадо М., Перес-Лусардо О., Рамос А., Перес С., Эрнандес Дж. Р., Боада Л. Д.. Гепатоцеллюлярные аденомы, связанные со злоупотреблением анаболическими андрогенными стероидами у бодибилдеров: отчет о двух случаях и обзор литературы. Br J Sports Med. 2005; 39: e27. DOI: 10.1136 / bjsm.2004.013599. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 13. Стимак Д., Милич С., Динтиньяна Р.Д., Ковач Д., Ристич С.Андрогенный / анаболический стероид-индуцированный токсический гепатит. J Clin Gastroenterol. 2002. 35: 350–352. DOI: 10.1097 / 00004836-200210000-00013. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 14. Дешмук Н.И., Захар Г., Петроци А., Секели А.Д., Баркер Дж., Нотон Д.П. Определение станозолола и 3'-гидроксистанозолола в шерсти, моче и сыворотке крыс с использованием тандемной масс-спектрометрии с жидкостной хроматографией. Chem Cent J. 2012; 6: 162. DOI: 10.1186 / 1752-153X-6-162. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 15. Mateus-Avois L, Mangin P, Saugy M.Использование ионной газовой хроматографии-множественной масс-спектрометрии для обнаружения и подтверждения следовых уровней 3'-гидроксистанозолола в моче для допинг-контроля. J Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci. 2005; 816: 193–201. DOI: 10.1016 / j.jchromb.2004.11.033. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 17. Бюттнер А., Тим Д. Побочные эффекты анаболических андрогенных стероидов: патологические данные и взаимосвязь между структурой и активностью. Handb Exp Pharmacol. 2010; 195: 459–484. DOI: 10.1007 / 978-3-540-79088-4_19.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 18. Рентукас Э., Царухас К., Капланис I, Короу Э, Николау М., Марафонитис G, Коккиноу С., Халиассос А., Мамалаки А., Куретас Д. и др. Связь активности теломеразы в МКПК с маркерами воспаления и эндотелиальной дисфункции у пациентов с метаболическим синдромом. PLoS One. 2012; 7: e35739. DOI: 10.1371 / journal.pone.0035739. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 21. Zhou X, Zhu H, Lu J. Экспрессия генов PTEN и hTERT и корреляция с гепатоцеллюлярной карциномой человека.Pathol Res Pract. 2015; 211: 316–319. DOI: 10.1016 / j.prp.2014.11.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 23. Ян Ц., Ли С., Ван М., Чанг А.К., Лю И, Чжао Ф, Сяо Л., Хань Л., Ван Д., Ли С., Ву Х. PTEN подавляет онкогенную функцию AIB1 за счет снижения стабильности его белка с помощью механизма, включающего Fbw7 альфа. . Молочный рак. 2013; 12:21. DOI: 10.1186 / 1476-4598-12-21. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 24. Jung S, Li C, Jeong D, Lee S, Ohk J, Park M, Han S, Duan J, Kim C, Yang Y и др.Онкогенная функция p34SEI-1 посредством NEDD4 1 опосредована убиквитинизацией / деградацией PTEN и активацией пути PI3K / AKT. Int J Oncol. 2013; 43: 1587–1595. DOI: 10.3892 / ijo.2013.2064. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 25. ОЭСР. Руководящий документ по распознаванию, оценке и использованию клинических признаков в качестве гуманных конечных точек для экспериментальных животных, используемых при оценке безопасности. ОЭСР; Париж: 2000. [Google Scholar] 26. Черичи Камарго IC, Баррейрос де Соуза Р., Фатима Паккола Мескита С., Чуффа Л.Г., Фрей Ф.Гистология яичников и оценка фолликулов у самок крыс, получавших деканоат нандролона и подвергавшихся физическим нагрузкам. Acta Biol Hung. 2009. 60: 253–261. DOI: 10.1556 / ABiol.60.2009.3.2. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 27. де Алмейда Чуффа Л.Г., де Соуза Р.Б., Фрей Ф., де Фатима Паккола Мескита С., Камарго IC. Деканоат нандролона и физическое усилие: гистологическая и морфометрическая оценка в матке взрослой крысы. Анат Рек (Хобокен) 2011; 294: 335–341. DOI: 10.1002 / ar.21314. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 28.Гопинатан С., О'Нил Э, Родригес Л.А., Чемпион Р., Филлипс М., Нуралдин А., Вендт М., Уилсон Эйдж, Крамер Дж. Токсикология наполнителей in vivo, обычно используемых при открытии лекарств на крысах. J Pharmacol Toxicol Methods. 2013; 68: 284–295. DOI: 10.1016 / j.vascn.2013.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 29. Healing G, Sulemann T, Cotton P, Harris J, Hargreaves A, Finney R, Kirk S, Schramm C, Garner C, Pivette P, Burdett L.Данные о безопасности 19 транспортных средств для использования в доклинических исследованиях на грызунах в течение 1 месяца: Введение гидроксипропил-β-циклодекстрина вызывает почечную токсичность.J Appl Toxicol. 2016; 36: 140–150. DOI: 10.1002 / jat.3155. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 30. Aye M, Di Giorgio C, De Mo M, Botta A, Perrin J, Courbiere B. Оценка генотоксичности трех криопротекторов, используемых для витрификации человеческих ооцитов: диметилсульфоксида, этиленгликоля и пропиленгликоля. Food Chem Toxicol. 2010; 48: 1905–1912. DOI: 10.1016 / j.fct.2010.04.032. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 31. Бертло-Рику А., Перрин Дж., Ди Джорджио С., де Мео М., Ботта А., Курбьер Б. Оценка генотоксичности 1,2-пропандиола (PrOH) на ооциты мышей с помощью анализа комет.Fertil Steril. 2011; 96: 1002–1007. DOI: 10.1016 / j.fertnstert.2011.07.1106. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 32. Каннингем Р.Л., Макгиннис М.Ю. Физическая провокация самцов крыс, подвергшихся воздействию пубертатных анаболических андрогенных стероидов, вызывает агрессию по отношению к самкам. Horm Behav. 2006; 50: 410–416. DOI: 10.1016 / j.yhbeh.2006.05.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 33. Matrisciano F, Modafferi AM, Togna GI, Barone Y, Pinna G, Nicoletti F, Scaccianoce S. Повторное лечение анаболическими андрогенными стероидами вызывает обратимые антидепрессантами изменения гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси, уровней BDNF и поведения.Нейрофармакология. 2010. 58: 1078–1084. DOI: 10.1016 / j.neuropharm.2010.01.015. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 34. Tucci P, Morgese MG, Colaianna M, Zotti M, Schiavone S, Cuomo V, Trabace L. Нейрохимические последствия злоупотребления стероидами: моноаминергические изменения, вызванные станозололом. Стероиды. 2012; 77: 269–275. DOI: 10.1016 / j.steroids.2011.12.014. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 35. Кара М., Озджагли Э., Фрагкиадаки П., Котил Т., Стивактакис П.Д., Спандидос Д.А., Цацакис А.М., Альпертунга Б. Определение повреждения ДНК и активности теломеразы у крыс, получавших станозолол.Exp Ther Med. 2017; 13: 614–618. DOI: 10.3892 / etm.2016.3974. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 36. Цицимпико Ц., Цацаракис М., Фрагкиадаки П., Коваци Л., Стивактакис П., Калогераки А., Куретас Д., Цацакис А. М.. Гистопатологические поражения, окислительный стресс и генотоксические эффекты в печени и почках после длительного воздействия диазинона и пропоксура на кроликов. Токсикология. 2013; 307: 109–114. DOI: 10.1016 / j.tox.2012.11.002. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 37. Сольбах П., Поттхофф А., Раатшен Х.Дж., Суда Б., Леманн Ю., Шнайдер А., Гебель М.Дж., Маннс М.П., ​​Фогель А.Тестостерон-рецептор-положительный гепатоцеллюлярная карцинома у 29-летнего культуриста с историей злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: отчет о болезни. BMC Gastroenterol. 2015; 15:60. DOI: 10.1186 / s12876-015-0288-0. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 38. Ливак К.Дж., Шмитген Т.Д. Анализ данных относительной экспрессии генов с использованием количественной ПЦР в реальном времени и метода 2 (-4Delta Delta C (T)). Методы. 2001; 25: 402–408. DOI: 10.1006 / meth.2001.1262. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 39.Кеслер Т., Сандху Р.С., Кришнамурти С. Гепатология: гепатоцеллюлярная карцинома у молодого человека, вторичная по отношению к злоупотреблению андрогенными анаболическими стероидами. J Gastroenterol Hepatol. 2014; 29: 1852. DOI: 10.1111 / jgh.12809. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 40. Боада Л. Д., Зумбадо М., Торрес С., Лопес А., Диас-Чико Б. Н., Кабрера Дж. Дж., Лусардо ОП. Оценка острых и хронических гепатотоксических эффектов анаболического андрогенного стероида станозолола у взрослых самцов крыс. Arch Toxicol. 1999. 73: 465–472. DOI: 10.1007 / s002040050636.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 41. Канаяма Дж., Хадсон Дж. И., Поуп Х. Дж., Младший. Долгосрочные психиатрические и медицинские последствия злоупотребления анаболическими андрогенными стероидами: надвигающаяся проблема общественного здравоохранения? Зависимость от наркотиков и алкоголя. 2008; 98: 1–12. DOI: 10.1016 / j.drugalcdep.2008.05.004. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 42. Орниш Д., Лин Дж., Чан Дж. М., Эпель Э, Кемп С., Вайднер Дж., Марлин Р., Френда С. Дж., Магбануа М. Дж. М., Даубенмьер Дж. И др. Влияние всесторонних изменений образа жизни на активность теломеразы и длину теломер у мужчин с подтвержденным биопсией раком простаты низкого риска: 5-летнее наблюдение за описательным пилотным исследованием.Ланцет Онкол. 2013; 14: 1112–1120. DOI: 10.1016 / S1470-2045 (13) 70366-8. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 43. Мишра С., Кумар Р., Малхотра Н., Сингх Н., Дада Р. Мягкий окислительный стресс полезен для поддержания длины теломер сперматозоидов. World J Methodol. 2016; 6: 163–170. DOI: 10.5662 / wjm.v6.i2.163. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 44. Зар Т., Грэбер С., Перацелла М.А. Распознавание, лечение и профилактика токсичности пропиленгликоля. Semin Dial. 2007. 20: 217–219. DOI: 10.1111 / j.1525-139X.2007.00280.x. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 45. Djojosubroto MW, Chin AC, Go N, Schaetzlein S, Manns MP, Gryaznov S, Harley CB, Rudolph KL. Антагонисты теломеразы GRN163 и GRN163L подавляют рост опухоли и повышают химиочувствительность гепатомы человека. Гепатология. 2005; 42: 1127–1136. DOI: 10.1002 / hep.20822. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 46. Василаки Ф., Цицимпико Ц., Цароухас К., Германакис I, Царди М., Каввалакис М., Озкагли Э., Куретас Д., Цацакис А. М.. Кардиотоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата.Toxicol Lett. 2016; 241: 143–151. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2015.10.026. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 47. Pilati C, Letouzé E, Nault JC, Imbeaud S, Boulai A, Calderaro J, Poussin K, Franconi A, Couchy G, Morcrette G и др. Геномное профилирование гепатоцеллюлярных аденом позволяет выявить повторяющиеся мутации, активирующие FRK, и механизмы злокачественной трансформации. Раковая клетка. 2014; 25: 428–441. DOI: 10.1016 / j.ccr.2014.03.005. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 49. Юнгерманн К., Кицманн Т. Зонирование паренхиматозного и непаренхиматозного метаболизма в печени.Annu Rev Nutr. 1996. 16: 179–203. DOI: 10.1146 / annurev.nu.16.070196.001143. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 50. Юнгерманн К. Метаболическое зонирование паренхимы печени. Semin Liver Dis. 1988. 8: 329–341. DOI: 10,1055 / с-2008-1040554. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 51. Сальвадор Дж. П., Санчес-Баеса Ф, Марко М. П.. Одновременное иммунохимическое определение станозолола и основного метаболита человека, 3'-гидроксистанозолола, в образцах мочи и сыворотки крови. Анальная биохимия. 2008; 376: 221–228. DOI: 10.1016 / j.ab.2008.02.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 52. Чилтон В.Л., Маркес Ф.З., Вест Дж., Канноуракис Дж., Берзиньш С.П., О'Брайен Б.Дж., Чарчар Ф.Дж. Острая физическая нагрузка приводит к регуляции генов, связанных с теломерами, и экспрессии микроРНК в иммунных клетках. PLoS One. 2014; 9: e
AAS анаболический андрогенный стероид
TERT теломераза обратная транскриптаза
TERC компонент теломеразы 9022 компонент теломеразы мира HCC гепатоцеллюлярная карцинома
PG пропиленгликоль
IS внутренний стандарт
APCI химическая ионизация при атмосферном давлении
химическая ионизация при атмосферном давлении
Финансирование

Это исследование было поддержано Научно-исследовательскими проектами Стамбульского университета (грант №54169-24416).

Доступность данных и материалов

Наборы данных, использованные и / или проанализированные в ходе текущего исследования, доступны у соответствующего автора по разумному запросу.

Вклад авторов

EO, MK, AMT, BA и DAS разработали и разработали исследование, написали рукопись и внесли ценные предложения при ее подготовке. MK, TK, PF и MNT выполнили LC-MS анализ, оценку активности теломеразы и экспрессии генов; CT, PDS и DT выполнили статистический анализ и интерпретацию данных.EO, MK и BA внесли свой вклад в заявку на финансирование. Все авторы читали и одобрили окончательный вариант рукописи.

Одобрение этики и согласие на участие

Эксперименты на животных были одобрены Комитетом по этике экспериментов на животных Стамбульского университета, HADYEK (номер разрешения 2013/100).

Согласие на публикацию

Не применимо.

Конкурирующие интересы

DAS является главным редактором журнала, но не принимал личного участия в процессе рецензирования или какого-либо влияния с точки зрения вынесения окончательного решения по этой статье.

Ссылки

1. Balcells G, Matabosch X, Ventura R. Обнаружение метаболитов O- и N-сульфата станозолола и их оценка в качестве дополнительных маркеров в допинг-контроле. Анальный тест на наркотики. 2017; 9: 1001–1010. DOI: 10.1002 / dta.2107. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 2. Цицимпико Ц., Василаки Ф., Царохас К., Фрагкиадаки П., Царди М., Гутзурелас Н., Непка Ц., Калогераки А., Херетис I, Эпитропаки З. и др. Нефротоксичность у кроликов после длительного приема нандролона деканоата. Toxicol Lett.2016; 259: 21–27. DOI: 10.1016 / j.toxlet.2016.06.1122. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 3. Всемирное антидопинговое агентство Список запрещенных веществ и методов 2017 года. https://www.wada-ama.org/. Проверено 14 февраля 2018 г. 4. Kioukia-Fougia N, Georgiadis N, Tsarouhas K, Vasilaki F, Fragiadaki P, Meimeti E, Tsitsimpikou C. Синтетические и натуральные пищевые добавки: «союзники» здоровья или риски для общественного здоровья. Недавние открытия Pat Inflamm Allergy Drug. 2017; 10: 72–85. DOI: 10,2174 / 1872213X106661603700.[PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 5. Цицимпику С., Хрисостому Н., Папалексис П., Царухас К., Цацакис А., Джамуртас А. Использование пищевых добавок спортсменами-любителями в Афинах, Греция. Int J Sport Nutr Exerc Exerc Metab. 2011; 21: 377–384. DOI: 10.1123 / ijsnem.21.5.377. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 6. Саго Д., Мольде Х., Андреассен С.С., Торсхайм Т., Паллесен С. Глобальная эпидемиология использования анаболических андрогенных стероидов: метаанализ и мета-регрессионный анализ. Ann Epidemiol. 2014; 24: 383–398.DOI: 10.1016 / j.annepidem.2014.01.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 7. Ампуэро Дж., Гарсия Э.С., Лоренцо М.М., Калле Р., Ферреро П., Гомес МР. Вызванный станозололом мягкий холестаз. Гастроэнтерол Гепатол. 2014; 37: 71–72. DOI: 10.1016 / j.gastrohep.2013.09.009. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 8. Баусерман Л.Л., Сарителли А.Л., Герберт П.Н. Влияние кратковременного приема станозолола на липопротеины сыворотки крови при печеночной липазной недостаточности. Обмен веществ. 1997; 46: 992–996. DOI: 10.1016 / S0026-0495 (97)
. DOI: 10.1371 / journal.pone.00. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 53. Ludlow AT, Gratidão L, Ludlow LW, Spangenburg EE, Roth SM. Острая физическая нагрузка активирует p38 MAPK и увеличивает экспрессию генов, защищающих теломеры, в сердечной мышце.Exp Physiol. 2017; 102: 397–410. DOI: 10.1113 / EP086189. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 54. Вардавас А.И., Стивактакис П.Д., Цацаракис М.Н., Фрагкиадаки П., Василаки Ф., Царди М., Дацери Г., Циаусис Дж., Алегакис А.К., Цицимпику С. и др. Длительное воздействие циперметрина и пиперонилбутоксида вызывает воспаление печени и почек и индуцирует генотоксичность у новозеландских белых кроликов-самцов. Food Chem Toxicol. 2016; 94: 250–259. DOI: 10.1016 / j.fct.2016.06.016. [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 55.Хуан С.К., Чианг В.Д., Хуанг В.К., Хуанг С.Й., Сюй М.С., Лин В.Т. Гепатопротекторные эффекты упражнений по плаванию на крысиной модели индуцированного D-галактозой старения. Evid Based Complement Alternat Med. 2013; 2013: 275431. DOI: 10.1155 / 2013/275431. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 56. Yi X, Cao S, Chang B, Zhao D, Gao H, Wan Y, Shi J, Wei W., Guan Y. Влияние острых и хронических упражнений на сигнальный путь лептин-AMPK-ACC в печени у крыс с диабетом 2 типа . J Diabetes Res. 2013; 2013: 946432.DOI: 10.1155 / 2013/946432. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 57. Петтерссон Дж., Хиндорф Ю., Перссон П., Бенгтссон Т., Мальмквист Ю., Веркстрём В., Экелунд М. Мышечные упражнения могут вызывать крайне патологические тесты функции печени у здоровых мужчин. Br J Clin Pharmacol. 2008. 65: 253–259. DOI: 10.1111 / j.1365-2125.2007.03001.x. [Бесплатная статья PMC] [PubMed] [CrossRef] [Google Scholar] 58. Brustia R, Savier E, Scatton O. Физические упражнения у пациентов с циррозом: к реабилитации в листе ожидания трансплантации печени.Систематический обзор и метаанализ. Клин Рес Гепатол Гастроэнтерол. 2017 ноябрь 18; Epub впереди печати. [PubMed] [Google Scholar]

Станозолол - обзор | Темы ScienceDirect

Незаконные ветеринарные препараты, вызывающие озабоченность в области общественного здравоохранения

Утвержденные ветеринарные контролируемые препараты, которые незаконно используются для лечения людей, включают болденон (Equipoise), кетамин, станозолол (Winstrol) и тренболон (Finajet). Ветеринарные препараты, содержащие анаболические стероиды, которые предназначены исключительно для введения через имплантаты крупному рогатому скоту или другим видам, не относящимся к человеку, и которые были одобрены CVM, US FDA, исключены из всех списков (Агентство по обеспечению соблюдения лекарственных средств: 21 CFR, части 1300–1316, Список планирования действий и контролируемых веществ, 1999b; наркотиков злоупотребления, 1997).

Гидрохлорид кетамина, известный как «специальный k» и «k», является общим анестетиком для человека и ветеринарии.

Кетамин производит эффекты, подобные пентахлорфенолу (PCP), с визуальными эффектами диэтиламида лизергиновой кислоты (LSD). Кетамин, продаваемый на улицах, поступает из незаконных поставок, в первую очередь из ветеринарных клиник. Его внешний вид похож на кокаин фармацевтического качества, его нюхают, добавляют в алкогольные напитки или курят в сочетании с марихуаной.Растет число случаев злоупотребления кетамином. Кетамин был включен в Список III Закона о контролируемых веществах (CSA) в августе 1999 года (Агентство по борьбе с наркотиками: 21 CFR, части 1300–1316, Списки контролируемых веществ, 1999a).

Обеспокоенность растущим незаконным рынком и распространенностью злоупотребления в сочетании с возможностью вредных долгосрочных последствий использования стероидов побудила Конгресс в 1991 году включить анаболические стероиды в Список III CSA. CSA определяет анаболические стероиды как любое лекарство или гормональное вещество, химически и фармакологически связанное с тестостероном (кроме эстрогенов, прогестинов и кортикостероидов), которое способствует росту мышц.Большинство запрещенных анаболических стероидов продаются в спортзалах, на соревнованиях и по почте. По большей части эти вещества ввозятся контрабандой в нашу страну. На незаконном рынке обычно встречаются болденон (эквипойз), этлестренол (максиболин), флюоксиместерон (галотестин), метандриол, метандростенолон (дианабол), метилтестостерон, нандролон (дураболин, дека-дураболин), оксандролон (анаваролон), оксидролон (анавар), оксидролон (анавар), оксидролон (анавар), оксидролон (анавар). (Винстрол), тестостерон и тренболон (Финаджет).Физические побочные эффекты включают повышенное кровяное давление и уровень холестерина, тяжелые угри, преждевременное облысение, снижение половой функции и атрофию яичек. У мужчин может возникнуть аномальное развитие груди (гинекомастия). У женщин анаболические стероиды обладают маскулинизирующим эффектом, что приводит к увеличению волос на теле, более глубокому голосу, уменьшению груди и меньшему количеству менструальных циклов. Некоторые из этих эффектов необратимы. У подростков злоупотребление этими агентами может преждевременно остановить удлинение костей, что приведет к задержке роста (Агентство по борьбе с наркотиками: 21 CFR, части 1300–1316, Список запланированных действий и контролируемых веществ, 1999b).

Станозолол - обзор | Темы ScienceDirect

Основные типы стероидных гормонов и их полусинтетических аналогов

Стероидные гормоны можно разделить на две основные группы: половые гормоны и кортикостероидные гормоны. Из половых гормонов андрогены секретируются в основном яичками (главный представитель: тестостерон), эстрогены яичниками (главный представитель: эстрадиол) и гестогены (прогестагены, прогестины) желтым телом (главный представитель: прогестерон).Кортикостероидные гормоны секретируются корой надпочечников. Один из основных представителей - кортизол (гидрокортизон). Структура этих гормонов представлена ​​на рисунке 1.

Рисунок 1. Структура нескольких стероидных гормонов.

В лекарственной терапии нативные гормоны в значительной степени заменены синтетическими или полусинтетическими производными, которые обладают более высоким и более селективным терапевтическим потенциалом. Некоторые очень важные синтетические аналоги андрогенов - это сложные эфиры и 17-метилпроизводное тестостерона.Из множества родственных анаболических стероидов сложные эфиры нандролона (19-нортестостерон), метандиенона (17 α -метил-17-гидрокси-1,4-андростадиен-3-он), станозолола (17 α -метил- 2'H-5 α -андрост-2-ено [3,2- c ] пиразол-17-ол и ацетат тренболона (17 β -гидрокси-4,9,11-эстратриен-3- один ацетат)

Среди синтетических эстрогенов и гестогенов особого упоминания заслуживают 17 α -этинил-17-гидроксипроизводных.Введение этинильной группы значительно увеличивает их гормональный потенциал, что позволяет снизить их дозу (например, в противозачаточных таблетках) до уровня 10 мкг на таблетку и 100 мкг на таблетку, соответственно. Характерными примерами этого типа являются эстрогенный этинилэстрадиол (17 α -этинил-1,3,5 (10) -эстратриен-3,17-диол) и гестогенный норэтистерон (17 α -этинил-17-гидрокси- 4-эстрен-3-он) и норгестрел, синтетический 13-этиловый аналог последнего.


Добавить комментарий

Ваш адрес email не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

*
*